[发明专利]副溶血性弧菌的实时荧光PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一组检测副溶血性弧菌的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸如序列表SEQ ID No.1至序列表SEQ ID No.3所示；其中序列SEQ ID No.1和SEQ ID No.2分别为检测副溶血性弧菌的正义引物和反义引物，序列SEQ ID No.3为检测副溶血性弧菌的荧光探针。

2.根据权利要求1所述的检测副溶血性弧菌的寡核苷酸，其特征在于，所述荧光探针序列SEQ ID NO：3的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA。

3.权利要求1或2所述的检测副溶血性弧菌的寡核苷酸在制备检测副溶血性弧菌试剂盒中的应用。

4.一种副溶血性弧菌的RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下物质：

（1）偶联有抗副溶血性弧菌单克隆抗体的免疫磁珠；

（2）RT-PCR反应液，其包括：序列表SEQ ID No.1所示的正义引物，序列表SEQ ID No.2所示的反义引物，序列表SEQ ID No.3所示的荧光探针；

（3）阴性对照；

（4）阳性对照。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述抗副溶血性弧菌单克隆抗体为保藏编号为CGMCC No.6061的杂交瘤细胞株分泌产生的副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体。

6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR反应液还包括TaqMan Gene Expression Master Mix溶液。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述RT-PCR反应液中各种成分的使用终浓度为1×TaqMan Gene Expression Master Mix溶液、0.4μM正义引物、0.4μM反义引物、0.4μM荧光探针。

8.一种副溶血性弧菌的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）免疫磁珠富集菌体；

2）提取菌体的DNA；

3）进行RT-PCR反应，其中，使用序列表SEQ ID No.1所示的正义引物，序列表SEQ ID No.2所示的反义引物，序列表SEQ ID No.3所示的荧光探针，所述荧光探针的5’端标记报告荧光基团FAM，3’端标记淬灭荧光基团TAMRA；

4）根据实时荧光RT-PCR反应体系的荧光强度进行结果判定。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述免疫磁珠为偶联有抗副溶血性弧菌单克隆抗体的免疫磁珠。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述抗副溶血性弧菌单克隆抗体为保藏编号为CGMCC No.6061的杂交瘤细胞株分泌产生的副溶血性弧菌鞭毛蛋白单克隆抗体。