[发明专利]一种合成点柄粘盖牛肝菌菌根的方法

权利要求书

1.一种合成点柄粘盖牛肝菌菌根的方法，其包括以下步骤：

A、采用组织分离法，在无菌条件下取点柄粘盖牛肝菌的菌柄与菌盖之间的组织接种于PDA试管斜面培养基上，得到点柄粘盖牛肝菌菌丝，将所述点柄粘盖牛肝菌菌丝与PDA试管斜面培养基分离，得到纯净的点柄粘盖牛肝菌菌丝，将纯净的点柄粘盖牛肝菌菌丝与无菌水混合后用搅拌机搅碎得到点柄粘盖牛肝菌菌剂；

B、将待栽培板栗无菌苗的根系沾满所述点柄粘盖牛肝菌菌剂后移栽在培养钵中，培养钵中填充有真菌与无菌土的混合物，7天-10天后向培养钵中浇灌所述点柄粘盖牛肝菌菌剂进行补接，然后以水浇灌，栽培三个月至一年，从板栗苗木的根系上得到所述点柄粘盖牛肝菌菌根。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A具体的包括：将所述组织接种于PDA试管斜面培养基上，待所述组织上长出少量点柄粘盖牛肝菌菌丝后，将其转接到新的PDA试管斜面培养基上进行培养，对在所述新的PDA试管培养基上培养后的点柄粘盖牛肝菌菌丝与所述新的PDA试管培养基进行分离。

3.根据权利要2所述的方法，其特征在于，所述步骤A中PDA试管斜面培养基由马铃薯、葡萄糖、琼脂粉与水组成，其重量份分别为：

马铃薯为100份-200份，葡萄糖10份-20份，琼脂粉15份-20份，水500份-1000份。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤A中对在所述新的PDA试管培养基上培养后的点柄粘盖牛肝菌菌丝与所述新的PDA试管培养基进行分离的过程为：用无菌水对新的PDA试管培养基与点柄粘盖牛肝菌菌丝洗涤三次，然后按照一升无菌水中菌丝鲜重为40g的比例，用搅拌机搅碎30秒制成点柄粘盖牛肝菌菌剂待用。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B具体的包括：

B1、将板栗种子用1%的高锰酸钾浸泡4-5小时表面消毒，之后无菌水洗涤至水无色，盛放在铺满脱脂棉的培养盘中，然后将所述培养盘放置于25℃的培养箱内培养2天，每间隔10小时-14小时用无菌水对培养箱进行保湿。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤B具体的包括：待所述步骤B1中70%以上的板栗种子裂口后，将所有板栗种子播种于装填有无菌培养基质的培养钵中，将培养钵放置于培养室内，所述培养室湿度为60%-75%，温度为20℃-25℃，并且每间隔5天-8天对培养钵浇水一次，培养一年得到所述待栽培板栗无菌苗。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤B具体的还包括：所述无菌培养基质由珍珠岩、蛭石与草炭土组成，珍珠岩、蛭石与草炭土按照体积比为1:4:5的比例混合。