[发明专利]一种生物样本玻璃化冷冻载体及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物样品冷冻装置领域，具体地，包括为辅助生殖技术领域中用于无菌玻璃化冷冻胚胎或卵细胞提供安全有效、操作简易的密闭式冷冻载体。

背景技术

在人工辅助生殖技术中，将体外受精后得到的多个胚胎或者从女性体内取出的多个卵子放入-196℃的液氮冻存，以供短期或长期的择期胚胎移植，成为了提高体外受精、胚胎移植成功率的常用方法。玻璃化冷冻生物样本其临床意义在于在冷却剂如液氮中可长期存储，经冷却剂冻存的胚胎或细胞会停止发育并可保存数十年，第二是冻存生物样本在复温后，可恢复一个或多个生物学意义上的活细胞。

当常温材料冻存时，常温材料与极低温冷却剂，如液氮相遇时产生的莱顿弗罗斯特效应，会在冻存材料表面形成阻隔热传导汽膜，并减慢所需冻存材料的降温速度，一般需增加冷冻保护剂浓度来防止生物样本冷冻过程中冰晶化的形成，而高浓度冷冻保护剂对生物样本具毒害性，导致复苏后的细胞质量降低，因此，追求快速冷冻的玻璃化冷冻技术得到发展。

目前，为了加快冷冻速率，国内外玻璃化冷冻载体较普遍的都采用开放式，有拉伸麦管法、石英毛细管法、Cryoloop法、Cryotip法等。2005年，Kuwayama提出了通过最小化溶液体积提高冷却速率的新方法--Cryotop法等，即将载有样本的冷冻载体直接浸入液氮中。但由于生物样本与液氮直接接触，不能提供生物样本储存的无菌环境，存在交叉污染风险，且液氮对细胞的直接毒性作用也未可预测（Covo A,Domingo J,Perez S,et al.Vitrification:an effective new approach to oocyte banking and preserving fertility in cancer patients[J].Clin Transl Oncol,2008,10(5):268-273;封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察，山东医药2010年底50卷第15期；），而新近的研究更表明，液氮中的低分子化合物对生物样本具有毒性（YPanagiotidis,P Vanderzwalmen,Y Prapas,E kasapi，et，al Open versus closed vitrification of blastocysts from an oocyte-donation programme:a prospective randomized study.Reproductive BioMedicine Online,In Press,Uncorrected Proof,Mar2013）。专利申请（200710192245.9）公开了一种阻止外源病源性物质污染生物样本的密封型玻璃化冷冻装置，但尽管做到了与冷却剂隔离的封闭体系，但由于需要热塑封闭等各种步骤，该类型的冷冻载体的操作仍显复杂。

因此，本领域迫切需要开发一种玻璃化冷冻效率高、操作方便、安全无毒的生物样品密闭式冷冻装置。

发明内容

本发明提供的高效玻璃化冷冻且操作简易的生物样本密闭保存装置。

本发明提供了一种生物样本玻璃化冷冻载体，所述的载体包括本体和密封帽，其中所述本体的近端和密封帽底部相互密封形成一密闭的冷冻样本放置区，所述的冷冻样本放置区设有一冷冻样本放置平台，

并且所述的本体设有冷却剂流通通道，且所述密封帽设有与所述冷却剂流通通道相对应的导流孔，使得进行生物样本冷冻时，在所述通道内流通的冷却剂与所述的冷冻样本放置区的外表面接触并冷却所述冷冻样本放置区内的生物样本。

在另一优选例中，在所述通道内流通的冷冻液体与所述的冷冻样本放置平台的外表面直接接触，从而冷却放置于所述冷冻样本放置平台上的生物样本。

在另一优选例中，在用生物样本玻璃化冷冻载体进行生物样本冷冻时，在所述的玻璃化冷冻载体外所流动的冷冻剂，与所述的冷冻样本放置平台的外表面直接接触，从而冷却放置于所述冷冻样本放置平台上的生物样本。

在另一优选例中，所述的本体近端和密封帽之间还设有密封垫圈。

在另一优选例中，所述的冷冻样品放置平台为一适宜样本大小的平坦表面；

并且(a)被设置于设于所述本体近端的顶部，或者被固定于所述本体近端的顶部；

或(b)被设置于所述密封帽的底部（尤其是内底面）；或被固定于所述密封帽的底部。

在另一优选例中，所述的冷冻样品放置平台与所述本体近端顶面在同一水平面；或所述的冷冻样品放置平台低于所述的本体近端顶面水平。