[发明专利]一种枣实蝇快速鉴定的方法

说明书

发明领域

本发明属于检疫性害虫检测领域，具体的，本发明涉及一种检疫性害虫枣实蝇的检测技术领域。

背景技术

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是一种入侵重大检疫性害虫，属双翅目Diptera实蝇科Tephritidae实蝇亚科Trypetinae实蝇族Trypetini咔实蝇属Carpomya Costa，原产于印度，是枣属植物的重要蛀果害虫，被列入我国“进境植物检疫性有害生物名录”。2007年首次在新疆吐鲁番地区的鄯善县，托克逊县及吐鲁番市发现，发生面积为1029.42hm²，导致果实产量及品质下降，丧失其经济价值，且造成的落果率高达70-90％，销毁有虫枣果2233.8t，对该地区1的枣果业造成了毁灭性的危害，严重影响农民种植红枣的积极性，农林外来入侵生物的传入给农林产业带来严重的经济损失。

枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)害虫主要以幼虫蛀食果肉，成虫不危害枣果，通常可造成的产量损失高达20％以上，发生严重的可以导致全部枣果受到危害，从而严重影响到红枣的产品质量及其整体的商品价值。随着经济的高速发展，无论是国内地区间还是国际间的商业贸易与人员往来都日渐频繁，实蝇的扩散几率也越来越高。枣实蝇的入侵可能对我国枣产业生产构成毁灭性危害，枣实蝇目前主要分布在意大利、高加索、毛里求斯、巴基斯坦、泰国、阿富汗等国家，在中国仅分布在新疆的吐鲁番地区，且疫情有向其它地区扩散的趋势。可见，当前最大的问题如何实现枣实蝇的快速检测鉴定。迄今为止，实蝇类害虫的种的鉴定主要依据成虫的形态特征，而卵、幼虫、蛹由于其特征差异小，且有些特征在其不同的发育时期不够稳定，因此依据形态学鉴定方法很难保证鉴定的准确度。即使枣实蝇的幼虫能依据形态学进行鉴定，但很大程度上依赖鉴定人员丰富的鉴定经验，这就制约了不同地区相关工作的进一步开展。在口岸检疫工作中，通常要将幼虫培养到成虫再进行鉴定，整个检疫鉴定过程时间长达数周，无法适应实际工作需要。显然，仅仅依靠形态学分析进行实蝇的系统发育关系与种类鉴定的研究，不能与日益增长的水果蔬菜贸易发展相协调，也不利于建立一个高效快速的检疫性实蝇的检测技术体系。从而造成检疫和防控工作具有相当大的困难。因此，非常有必要研究枣实蝇快速鉴定的新方法，特别是枣实蝇幼虫、蛹等未成熟虫态的快速鉴定方法。

目前，检验检疫部门对枣实蝇的鉴定主要以成虫的外部形态特征作为依据。但是，截获的往往是卵、幼虫或蛹等虫态，传统方法是对其进行室内饲养，待成虫羽化后再进行鉴定，这需要5d-15d的检测周期，无法适应检验检疫的快速验放要求。在检疫截获未成熟虫态(幼虫或蛹)的几率较大，一般情况下室内饲养至成虫大约需5d-15d左右的时间，检测周期较长，不能满足贸易性果蔬现场检疫快速通关的需求，因此利用分子生物学技术快速检疫鉴定害虫种类已成为趋势。

发明内容

针对现有技术中未见报道专门针对检疫性害虫枣实蝇的检测的技术现状。本发明为了提供了一种针对枣实蝇的快速鉴定方法，能够准确及时对截获的疑似枣实蝇的卵、蛹、幼虫、成虫及残体等进行鉴定。

本发明的技术方案：本发明首次应用分子生物学方法对吐鲁番枣实蝇幼虫、蛹、成虫等mtDNA COI基因序列进行DNA检测分析，采用形态学观察与PCR技术相结合的方法对新疆吐鲁番地区的枣实蝇Carpomya vesuviana Costa幼虫、蛹、成虫等进行快速鉴定；最终首次测出枣实蝇mtDNA COI基因序列，并且设计出一对枣实蝇COI特异性引物，同时通过形态学鉴定确认的七种实蝇标本进行验证，证实本发明提供的枣实蝇快速鉴定的方法具有普遍性，为检验检疫部门提供非常快捷实用的方法。

本发明具体提供了一种针对枣实蝇快速鉴定的方法，其具体步骤如下：

(1)枣实蝇形态鉴定：对枣实蝇幼虫和蛹进行形态学观察，解剖镜下观察幼虫的头部特征、气门形状、尾部特征，蛹的气门特征等，并进行拍照，同时对多余的幼虫和蛹进行室内培养；枣实蝇标本的鉴定根据枣实蝇的形态学特征，用体式显微镜观察各鉴定部位包括头部、复眼、喙、中胸背板、翅脉、臀条、腹部、雌雄虫生殖器、根据外部形态进行鉴定，从而确定所用的材料均为枣实蝇。