[发明专利]一种腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，包括PCR反应液、引物探针组合、阳性质控品、阴性质控品，其特征在于，还包括核酸提取用液及核酸提取用内参照品；

所述内参照品为灭活的T4噬菌体，所述引物探针组合包括腺病毒核酸用引物探针及内参照品用引物探针，所述内参照品用引物探针为：

SEQ ID NO1:CCATCCATAGAGAAAATATCAGAACGA；

SEQ ID NO2：TAAATAATTCCTCTTTTCCCAGCG；

SEQ ID NO3：AACCAGTAATTTCATCTGCTTCTGATGTGAGGC,其5’端连接荧光报告基团，3’端连接荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述腺病毒核酸用引物探针包括通用型引物探针：

SEQ ID NO4:GCCACGGTGGGGTTTCTAAACTT；

SEQ ID NO5:GCCCCAGTGGTCTTACATCATGCACATC；

SEQ ID NO6:TGCACCAGACCCGGGCTCAGGAGGTACTCCGA，其5’端连接荧光报告基团，3’端连接荧光淬灭基团。

3.根据权利要求1或2所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述腺病毒核酸用引物探针还包括B和E亚群分型引物探针：

SEQ ID NO7：GATGGCCACCCCATCGATGMTGC

SEQ ID NO8：GCGAACTGCACCAGACCCGGAC

SEQ ID NO9：TACATGCACATCGCCGGACAGGAMGCTTCGGAGT，其5’端连接荧光报告基团，3’端连接荧光淬灭基团。

4.根据权利要求1或2所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述5’端荧光报告基团为ROX、FAM、VIC、HEX、Cy3或Cy5，3’端荧光萃灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3。

5.根据权利要求3所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述5’端荧光报告基团为ROX、FAM、VIC、HEX、Cy3或Cy5，3’端荧光萃灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3。

6.根据权利要求1所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述核酸提取用液包括裂解液、核酸结合液、洗涤液，其中：

裂解液主要是由如下组份组成：胍盐浓度为5-8M；Tris-HCl浓度为10-100mM,pH值为5.0-6.7；EDTA浓度为10-100mM。

核酸结合液是由非结晶的二氧化硅经盐酸处理配制而成；

洗涤液是用DEPC处理的去离子水配制70%的乙醇。

7.根据权利要求1-6任一项所述的腺病毒多重荧光定量PCR检测试剂盒的使用方法，包括荧光定量PCR检测反应，其特征在于，在荧光定量PCR检测反应前还采用所述核酸提取用液进行病毒核酸提取，并在病毒核酸提取过程中加入所述内参照品，对应地，在荧光定量PCR检测反应中加入所述的内参照品用引物探针。