[发明专利]一种优秀冰雪运动员血管紧张素转化酶部分多肽多克隆抗体制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种血管紧张素转化酶部分多肽，本发明特别涉及优秀冰雪运动员血管紧张素转化酶部分多肽及多肽的应用，属于运动医学、细胞生物学和生物技术交叉领域。 

背景技术

多克隆抗体技术(Polyclone antibodies preparation technique)，抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。 

血管紧张素转化酶(Angiotension Converting Enzyme，ACE)由1300个氨基酸组成，是一种羧基肽酶，也是一种糖蛋白。分子量为90-160kD。ACE基因定位在染色体17q23.2，为单拷贝基因，全长21kb，包含26个外显子和25个内含子。肾素-血管紧张素系统(RAS)是血压和体液、电解质平衡的主要调节因素之一。血管紧张素转化酶(ACE)是RAS的关键酶之一，又称肽基二肽酶A，主要位于血管内皮细胞，同时以循环形式存在于几种生物体液中。ACE有降解缓激肽、促成血管紧张素I(Ang I)转化为血管紧张素II(Ang II)的功能，血管紧张素和缓激肽在血管紧张性调节和平滑肌细胞的增生上有相反作用。目前认为ACE基因是决定人体有氧耐力素质的关键因素，ACE基因不但影响人体有氧耐力素质的最佳水平，还影响人体对耐力训练的敏感度。一般认为，ACE基因主要影响人体的心肺功能，从而影响人体的有氧耐力素质。最大摄氧量(VO2max)是耐力的重要限制性因素。VO2max与ACE-I/D多态关系的研究已有报道，但结果并不完全一致。研究发现，优秀运动员的ACE基因的存在有某些共同特征。在ACE基因的两种等位基因I和D两种形式中，形式I使人体血液中的ACE水平较低，然而D型起相反作用，拥有至少一个I基因的人，其耐力比拥有两个D基因的人要强。由此推测，I基因能增强肌肉吸收氧和营养成分的能力，有助于增强人的有氧耐力。研究表明，优秀冰雪运动员的静态、动态肺活量和心脏功能参数 与常人无显著性差异，推测ACE对耐力运动的影响可能主要是由肌肉微观结构方面的变异引起的。Montgomery等研究发现，33名优秀运动员ACE-I/D基因型分布和等位基因频率与普通人对照组呈显著性差异。 

因此制备ACE多克隆抗体用于鉴别肌肉组织ACE表达量可以推断优秀冰雪运动员耐力素质的水平，在分子生物学水平预测运动员的耐力水平。 

发明内容

本发明的目的为提供一种优秀冰雪运动员的ACE部分多肽，及其制备ACE多克隆抗体。 

一种血管紧张素转化酶部分多肽，其中，其氨基酸序列为： 

Ala Arg Asn Asp Cys Glu Gln Gly His Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val Gln TyrMet Tyr Cys。 

一种含血管紧张素转化酶部分多肽的多肽-载体复合蛋白，其中，载体蛋白是匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白。 

血管紧张素转化酶部分多肽的多肽-载体复合蛋白，其中，多肽-载体复合蛋白对照多肽与KLH按照质量比1∶1偶联，形成多肽-KLH复合蛋白。 

血管紧张素转化酶部分多肽的多肽-载体复合蛋白，其中，免疫多肽-KLH复合蛋白与佐剂混合。 

多肽或多肽-载体复合蛋白在制备血管紧张素转化酶多克隆抗体中的用途。