[发明专利]以菊芋为唯一碳源培养辣椒疫霉菌的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物培养的新型培养基，具体说是一种以菊芋粉作为唯一碳源利于辣椒疫霉菌快速生长产孢的新型培养基。

背景技术

辣椒疫病（Phytophthora Capsici）是一种毁灭性的病害，该病发病周期短、流行速度迅猛，特别在灌水或久雨过后天气转晴、气温急剧上升时，最易暴发流行，近几年来发病率从18%上升至80%。目前生产上缺乏抗疫病的辣椒品种，防治辣椒疫病主要靠栽培防病和化学保护措施，但效果甚微。因此，解决这一问题的根本有效途径是加快辣椒抗病资源的选育，培育抗病品种同时全面开展辣椒疫霉菌遗传结构及群体生物学特性研究。对辣椒资源进行室内人工接种抗疫病鉴定关键是短期内繁殖足够的辣椒疫霉菌孢子囊，能够短期内快速鉴定辣椒资源的抗病性。同时，对辣椒疫霉菌遗传结构及群体生物学特性研究也需要能够快速生长并较快产孢的培养条件，目前实验所用为常规的马铃薯葡萄糖培养基或胡萝卜培养基，但在短时间内不能够快速的生长及产生足够量的孢子囊。鉴于此，发明一种用于培养辣椒疫霉菌产孢及生长的新型培养基已成为当务之急。

发明内容

本发明针对辣椒疫病的室内人工接种鉴定要短期内繁殖足够的辣椒疫霉菌孢子囊和开展辣椒疫霉菌遗传结构深入研究的需要，提供一种辣椒疫霉菌室内快速生长产孢的培养基。

本发明的技术解决方案是：

一种以菊芋为唯一碳源培养辣椒疫霉菌的培养基，其制备方法为：每1000mL的纯净水中加入60g的菊芋粉，放到电磁炉上煮沸20min，然后加入20g琼脂，定容至1000mL；分装到250mL的三角瓶中，并在121℃的条件下高压灭菌20min即可得到菊芋粉培养基。

所述的培养基，所述菊芋粉的制备方法为：菊芋块茎，洗净切片约2-3mm，放到80℃的烘箱中烘干；将烘干后的菊芋切片放到粉碎机中充分粉碎后，用40目的筛子过筛，得到菊芋粉。

所述的培养基，高压灭菌条件为121℃，20min。

本发明培养基以分布广、资源丰富的菊芋块茎作为原材料，操作简单，无需特别仪器即可制备，并节约成本；辣椒疫霉菌在菊芋粉培养基上可以快速生长并较快产生大量孢子囊。

附图说明

图1为不同培养基上辣椒疫霉菌日生长量比较；

图2为不同培养基菌落形态比较；

具体实施方式

为了清楚地理解本发明，以下结合实例详细叙述这种菊芋粉培养基的制备方法，本发明不限于以下实施例。

1、采集菊芋块茎，洗净切片2-3mm，放到80℃的烘箱中烘干。

2、将烘干后的菊芋片放到粉碎机中充分粉碎后，用40目的筛子过筛，得到菊芋粉。

3、每1000mL的纯净水中加入60g的菊芋粉，放到电磁炉上煮沸20min，然后加入20g琼脂，定容至1000mL；分装到250mL的三角瓶中，并在121℃的条件下高压灭菌20min即可得到菊芋粉培养基。

4、将灭菌后冷却至60℃的菊芋粉培养基在无菌操作台内倒平板，待冷却后，于培养皿中央接入辣椒疫霉菌菌饼（Φ=9mm），放到26℃的条件下光照培养5d，每处理3个重复，每重复移植5个培养皿（Φ=9cm）以常规配方的马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、常规配方的胡萝卜（CA）培养基作为对照，记录菌丝体日生长量、菌落厚度及形态（图1、图2）。

5、培养10d以后，用消毒毛笔蘸取蒸馏水顺方向镇压菌丝，使菌丝平贴到培养基表面，将培养皿放入26℃的光照培养箱中，培养24小时后，向培养皿内注入蒸馏水，用消毒的毛笔将培养基上生成的孢子囊洗刷，用双层纱布过滤，收集孢子囊悬浮液并定容到相同体积（100mL），镜检40倍视野下孢子囊数，每重复做5张片子，每张片子均匀查16个视野，统计孢子囊数目，得到孢子囊浓度。

表1不同培养基菌落厚度及形态比较

注：“++++”表示菌落很厚，“+++”表示菌落较厚，“++”表示菌落厚度较薄。

表2不同培养基诱导孢子囊浓度比较

注：同列不同字母为经Ducan’s新复极差法测验有显著性差异（P<0.05）。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。