[发明专利]一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂及其应用。

背景技术

南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic virus，ArMV)属于豇豆花叶病毒科（Comoviridae）线虫传多面体病毒属（Nepovirus）成员。其地理分布极广，在五大洲30几个国家有发生，属于世界性病害。在我国未见该病毒危害的报道，是我国对外重要的检疫性植物病毒。

该病毒寄主范围广，可侵染植物约174属、215种，主要危害黄瓜、莴苣、马铃薯、胡萝卜、郁金香、烟草、樱桃、葡萄、草莓、菠菜、玫瑰、大豆、菜豆等经济作物。

ArMV可通过种子、鳞球、块茎及苗木等无性繁殖材料进行远距离传播。在田间汁液、嫁接等均可传毒。种子也可传毒,至少有14个科20种植物通过种子传毒,一般寄主植物种传率可达10%以上,有的可高达100%。传毒介体有Xiphinema diversicaudatum和Xiphinema coxi。线虫在感染ArMV的病株上取食,它的吻针和食道携带类似病毒的颗粒。加洲菟丝子(Cuscuta californica)和另一种菟丝子(Cuscuta subinclusa)常传病毒。

目前，检测南芥菜花叶病毒的方法主要有酶联免疫吸附测定（ELISA）、电镜技术和RT－PCR等技术。也有采用实时荧光PCR检测ArMV的研究所道。如李彬等采用ELISA和RT-PCR凝胶电泳方法检测ArMV（李彬，于翠，吴翠萍等，进境荷兰郁金香种苗中南芥菜花叶病毒的鉴定.植物保护学报，2010，37（1）19-24.）；邓丛良等采用RT-Realtime PCR检测ArMV（邓丛良，吕玉峰等.应用RT-Real time PCR检测南芥菜花病毒.植物检疫，2008，22（2）：80-82.）。

电镜技术设备昂贵，检测灵敏度低；ELISA技术操作步骤繁琐、检测周期长、灵敏度低、易出现假阳性。PCR凝胶电泳技术较ELISA在多个方面有所提高，但易于造成污染。未见采用半巢式RT-Realtime PCR检测Armv的研究所道。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂及其应用。

本发明提供的辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂，包括特异引物；所述特异引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成。

所述试剂可由所述特异引物和特异探针组成；所述特异探针的核苷酸序列如序列表的序列4所示。所述特异探针可为TaqMan探针。

所述试剂可用于制备辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂盒。

本发明还保护一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的试剂盒，包括所述试剂。

所述试剂可用于辅助鉴定南芥菜花叶病毒。

本发明还保护一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲进行PCR，得到PCR产物甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙进行PCR，得到PCR产物乙；如果PCR产物甲为103bp且PCR产物乙为73bp，待测病毒为候选的南芥菜花叶病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成的引物对。

本发明还保护另一种辅助鉴定南芥菜花叶病毒的方法，包括如下步骤：以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对甲和特异探针进行实时荧光PCR，得到扩增曲线甲；以待测病毒的cDNA为模板，用特异引物对乙和所述特异探针进行实时荧光PCR，得到扩增曲线乙；根据扩增曲线甲和扩增曲线乙判断待测病毒是否为候选的南芥菜花叶病毒；所述特异引物对甲为序列表的序列1所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成的引物对；所述特异引物对乙为序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA组成的引物对；所述特异探针为TaqMan探针，核苷酸序列如序列表的序列4所示。如果所述扩增曲线甲和所述扩增曲线乙均为阳性，待测病毒为候选的南芥菜花叶病毒。

所述待测病毒具体可为南芥菜花叶病毒、马铃薯X病毒、番茄黑环斑病毒或马铃薯Y病毒脉坏死株系（PVY^N）毒源。

本发明还保护一种检测待测样本中是否含有南芥菜花叶病毒的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测样本的总RNA，反转录为cDNA；