[发明专利]食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品或饲料中小麦成分的LAMP检测方法和试剂盒。

背景技术

食物过敏是人们对食品产生的一种不良反应，属机体对外源物质产生的一种变态反应，目前，国际公认的主要八大类过敏食品为：大豆、花生、小麦、蛋、奶、鱼、坚果、甲壳类。食物过敏的一般症状包括呕吐、腹痛、腹泻等，也包括皮肤反应及呼吸道症状，严重情况下甚至会出现系统性过敏性休克或死亡。对于食物过敏治疗尚无特效方法，严格避免食用含有过敏原成分的食品是最有效的疗法。完全的食物禁忌很难实现，因为食物过敏原可能隐藏在其他食物当中。为保护过敏人群，各国政府和国际组织相继修改和出台规范食品中过敏原标识的法律法案，对食品标签上过敏原成分的标注作出严格规定。

小麦是最常用的食品原料，广泛应用于食品及食品工业，其过敏性对过敏人群的影响显而易见。美国、欧盟、加拿大等国要求强制性标识食品过敏原小麦成分。因此对食品中小麦成分的检测尤为重要。

对于食品中食品过敏原成分的检测研究，主要有以蛋白质为基础的方法(如ELISA方法)和以基因为基础的方法(如PCR方法)，这两种方法都需要高端仪器设备、专业操作人员。本领域目前还没有检测效果良好且操作简单、设备要求低的特异性检测食品过敏原小麦成分的试剂和方法。

发明内容

本发明的目的在于提供食品过敏原小麦成分LAMP现场快速检测方法。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定食品过敏原小麦成分的方法，所述方法包括：以待测样品的DNA为模板，以特异性扩增小麦GAG56D基因的引物进行扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含食品过敏原小麦成分。

在一个优选例中，所述的扩增是环介导等温扩增(LAMP)。

在另一优选例中，所述的特异性扩增小麦GAG56D基因的引物包括：上游外引物SEQ ID NO:1，下游外引物SEQ ID NO:2，上游内引物EQ ID NO:3，下游内引物SEQ ID NO:4，上游环引物SEQ ID NO:5，下游环引物SEQ ID NO:6。

在另一优选例中，所述的环介导等温扩增包括：63±1℃(较佳地63±0.5℃)恒温反应45±10min(较佳地45±5min)，然后在80±2℃(较佳地80±1℃)灭活5±1min(较佳地5±0.5min)，结束反应。

在另一优选例中，所述的环介导等温扩增的体系中包括引物、Mg²⁺、甜菜碱、dNTPs；

其中，Mg²⁺浓度6±1mM；甜菜碱浓度0.8±0.1M；dNTPs浓度1.6±0.2mM。

在另一优选例中，在环介导等温扩增反应结束后，在扩增产物中加入SYBR Green I荧光染料观察颜色变化，没有扩增产物的阴性管呈橙色，有扩增产物的阳性管为绿色

在另一优选例中，所述的待测样品是食品。

在本发明的另一方面，提供一种引物，所述引物是LAMP扩增引物，包括：上游外引物SEQ ID NO:1，下游外引物SEQ ID NO:2，上游内引物EQ ID NO:3，下游内引物SEQ ID NO:4，上游环引物SEQ ID NO:5，下游环引物SEQ ID NO:6。

在本发明的另一方面，提供所述的引物的用途，用于从待测样品中鉴定食品过敏原小麦成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定食品过敏原小麦成分的试剂盒，其中包括前面所述的引物。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：

含有小麦成分的检测标准品；

DNA提取试剂；

pH缓冲试剂(如Tris-HCl(PH8.8))；

钾离子溶液；

镁离子溶液；

铵离子溶液；

Tween20；

甜菜碱；

dNTP；

Bst大片段DNA聚合酶；

荧光染料(如SYBR Green I荧光染料)；和/或

说明鉴定食品过敏原小麦成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、食品过敏原小麦LAMP检测引物反应时间的实时浊度扩增图谱。CH1-3：阴性对照，CH4-6：阳性对照。

图2、食品过敏原小麦LAMP检测引物体系优化的实时浊度扩增图谱。CH1-2：阴性对照，CH3-4：阳性对照。