[发明专利]高效表达GRP78蛋白的DLD1稳定细胞株及其构建方法

权利要求书

1.一种高效表达GRP78蛋白的DLD1稳定细胞株，特征在于，其是以大肠癌DLD1细胞作为宿主细胞，感染带有GRP78基因的慢病毒过表达系统，经药物筛选、扩增后得到。

2.如权利要求1所述的高效表达GRP78蛋白的DLD1稳定细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)利用人工寡核苷酸合成和聚合酶链式反应技术，以DLD1细胞cDNA为模板扩增人GRP78全长基因序列；

2)将扩增的人GRP78全长基因序列克隆到pEASY^TM-Blunt载体中，构建成pEASY^TM-Blunt-GRP78载体；

3)双酶切pEASY^TM-Blunt-GRP78载体，将获得的GRP78全长基因克隆到慢病毒过表达载体pLVX-AcGFP-N1中，构建成慢病毒表达质粒pLVX-GRP78-AcGFP-N1；

4)pLVX-GRP78-AcGFP-N1质粒与慢病毒包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染HEK-293T细胞，收集细胞培养基上清后获得GRP78基因过表达的慢病毒感染液；

5)用步骤4)获得的慢病毒感染液转染生长状态良好的DLD1细胞，用浓度为5μg/ml的puromycin筛选出单细胞克隆，并扩大培养，体外传代15代以上。