[发明专利]一种纯净的胎儿完整基因组DNA的分离获取方法

说明书

技术领域

本发明属于医学领域，具体地说，是关于一种纯净的胎儿完整基因组DNA的分离获取方法。

背景技术

产前遗传诊断是在遗传咨询的基础上，主要通过遗传学检测和影像学检查，对高风险胎儿进行明确诊断，使人们有科学依据地在妊娠期做出适当的选择或治疗，从而降低出生缺陷率，提高优生质量和人口素质。

产前遗传诊断包括有创和无创两种类型。前者主要包括羊膜腔穿刺、绒毛取样、脐血取样、胎儿镜和胚胎活检等，后者包括超声波检查、母体外周血清标志物测定、无创胎儿基因和细胞遗传学分析等。

目前产前遗传诊断中仍以创伤性方法为主，以羊膜腔穿刺和绒毛取样两种最常用，然而，对胎儿有创取材时存在以下风险：1、胎儿一过性心动过缓；2、0.1%～0.9%的被检者发生早产或胎儿宫内死亡；3、脐带取血后脐带胎盘渗血；4、羊膜腔内感染；5、羊膜破裂；6、胎儿畸形。

在无创性方法中，超声波检查只能从形态上分辨一些有明显先天畸形的胎儿，对于形态正常而带有其它遗传缺陷的胎儿则无法鉴别。母体外周血清标志物测定是从母体血清标志物进行间接检测，因此检查的项目有限，现在开展的主要是唐氏筛查，这只是染色体三体综合征中的一种，绝大多数的遗传病都无法以类似的无创方法进行检测。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本申请的发明人提供了一种从孕妇外周血中分离并鉴定胎儿完整基因组DNA的方法，该方法能够无创性地获得纯净的胎儿完整基因组DNA，从而为全面、准确的产前遗传诊断的应用提供了物质基础。

因此，本发明的目的在于提供一种纯净的胎儿完整基因组DNA的分离获取方法。

本发明的纯净的胎儿完整基因组DNA的分离获取方法包括以下步骤：

A）从母体（孕妇）外周血中分离有核红细胞；

B）从胎儿母亲和/或父亲的体细胞中提取基因组DNA或分离单细胞进行高保真全基因组DNA扩增，鉴定胎儿母亲和/或父亲的个体遗传特征分型；

C）将有核红细胞分离单细胞进行高保真全基因组DNA扩增；

D）以胎儿母亲和/或父亲的个体遗传特征分型为对照，根据遗传规律对有核红细胞单细胞全基因组DNA扩增产物进行鉴定并确定胎儿的个体遗传特征分型，从而确定胎儿来源的基因组DNA。

根据本发明，所述母体（孕妇）外周血为妊娠9～38周的母体（孕妇）外周静脉血。

根据本发明，所述个体遗传特征分型包括使用SNP组合或STR组合等的基因分型鉴定，优选SNP组合。

根据本发明，所述分离有核红细胞的方法包括：免疫磁珠分选法或称磁激活细胞分选法、流式细胞分选法或称荧光激活细胞分选法、电荷流式分离法、培养筛选富集法或密度梯度离心法等。

根据本发明，所述母亲和/或父亲的体细胞来源自：头皮屑、口腔上皮或孕前母亲的外周血等。

根据本发明，所述鉴定个体遗传特征分型的方法包括：基因芯片法、PCR测序法、MGB荧光PCR法、限制性片断长度多态性法、单链构象多态性法、变性梯度凝胶电泳法、飞行质谱仪检测法或变性高效液相色谱法等。

本发明具有如下优点：

1.无创性，产前取孕妇外周血，对胎儿无创伤，对孕妇的影响也极其轻微。

2.超前性，最早可在孕9周进行遗传检测，可对遗传病做到早发现、早预防、早诊断、早治疗。

3.准确性，以母亲和/或父亲的基因组DNA为对照，采用个体特异性遗传标记鉴定胎儿单细胞来源的全基因组DNA，保证胎儿细胞及全基因组DNA来源准确；源于胎儿不同细胞的全基因组DNA可进行多个平行诊断实验，并相互确认，避免基因组扩增误差而带来的误诊问题，确保诊断结果准确可靠。

4.纯净性，经鉴定为胎儿的基因组，只源于单个细胞，不会受母体（孕妇）DNA的污染，从而保证后续遗传诊断的准确性。

5.普适性，能获取源自胎儿的完整全基因组DNA，选择不同的位点或使用不同的标记及标记组合，即可进行大量的单个和全基因组水平上的各类基因（DNA）分析、单基因病诊断、个体药物耐受性、多基因病致病风险等除细胞遗传学分析外的所有的遗传诊断。

有核红细胞在孕妇外周血中存量大，且生命周期短，不受前次妊娠的影响，是无创法鉴定胎儿基因型的最理想材料，本发明结合个体遗传特征鉴定的方法获取胎儿来源的全基因组DNA，具无创性、超前性、准确性、纯净性和普适性，为产前遗传诊断应用奠定了物质基础。

具体实施方式