[发明专利]抗猪Foxp3蛋白的单克隆抗体、多克隆抗体及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及猪Foxp3蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，及两者在检测猪Foxp3蛋白中的应用。 

背景技术

T细胞在免疫网络中扮演着重要的角色。根据对抗原刺激的应答，初始CD4⁺T细胞可分化为效应细胞的两个亚群——Th1细胞和Th2细胞。产生1型促炎细胞因子（如IFN-γ、IL-2、TNF-β）的Th1细胞调节细胞免疫应答；产生2型抗炎细胞因子（IL-4、IL-5、IL-10）的Th2细胞参与体液免疫应答。像CD4⁺T细胞一样，CD8⁺T细胞也能分化为两个亚群：产生1型细胞因子的Tc1细胞和产生2型细胞因子的Tc2细胞。这些细胞在免疫应答中各司其职，并相互促进或相互拮抗，而在T细胞中，还存在着一类不同于以上各类细胞的具有负调节功能的T细胞群体，被称作“调节性T细胞”（regulatory T cells, Treg）。此类细胞在抗移植、抗肿瘤、抗感染等免疫反应中发挥着重要的调节作用，已成了近年来免疫学研究领域的重要内容。 

具有明显免疫抑制作用的Treg可根据其起源分为两类：天然调节性T细胞（natural Treg, nTreg）和诱导性调节性T细胞（induced Treg, iTreg）。后者是由静息T细胞在特定条件下诱导分化而成的，主要分为Tr1细胞（T regulatory 1）、Th3细胞和适应性Treg（adaptive Treg, aTreg）。而与iTreg不同，nTreg在胸腺内分化、发育和成熟，然后释放至外周血发挥调节作用，占外周CD4⁺T细胞总数的10%。由于其在维持免疫系统稳态中发挥重要作用，而成为免疫学研究领域的热点。 

CD4⁺CD25⁺T细胞又称作天然调节性T细胞（natural regulatory T cell, nTreg），可限制效应应答的强度，另一方面，也可限制由过强抗感染免疫应答所带来的组织损伤。因此，nTreg的表达水平是一个较好地反映细胞免疫功能的参考指标，可以用于临床免疫功能的监测，也可以用于某些疾病进展和预后的判断。疾病过程中nTreg数量的变化常伴随着效应性免疫应答强度的改变，监测nTreg有望成为评价动物体内细胞免疫状态和了解疾病进展的有效细胞免疫指标。传统的nTreg鉴定方法主要是通过标记CD4⁺和CD25⁺进行检测。然而，感染免疫应答后被活化的 T 细胞也表达CD25，从而使得区分调节性T细胞和活化T细胞变得十分困难。因此，有必要利用一种唯一性的调节性T细胞标记物。新近的研究显示，转录因子叉头框P3（forkhead box P3, Foxp3）被鉴定为nTreg发育和功能的主要调节器，也是nTreg迄今最特异的标志。因此，建立检测猪Foxp3快速、特异的方法对于猪体内nTreg水平的监测极为重要。 

目前，科研中检测猪Foxp3的免疫学方法主要应用抗人/鼠Foxp3的抗体，由于抗人/鼠Foxp3的抗体对猪Foxp3有交叉反应性，抗人/鼠Foxp3的抗体对于检测猪Foxp3是相对特异的，并非如抗猪Foxp3的抗体一样是完全特异的，因此，制备特异性高的抗猪Foxp3蛋白的单克隆抗体对于评价养殖猪体内细胞免疫状态和了解疾病进展具有重要的意义。 

发明内容

本发明的一个目的在于根据猪Foxp3基因和大肠杆菌的密码子偏爱性，优化猪Foxp3基因，从而提高目的序列在大肠杆菌中的异源表达水平。 

本发明的另一个目的是利用上述优化基因制备抗猪Foxp3蛋白的单克隆抗体。 

本发明的另一个目的是提供分泌上述单克隆抗体的杂交瘤细胞株。 

本发明的目的通过如下技术方案实现： 

密码子优化的猪Foxp3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

一种分泌抗猪Foxp3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株4C8，于2012年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心（CHINA CENTER FOR TYPE CULTURE COLLECTION），地址：中国，武汉，武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C2012156。 

一种抗猪Foxp3蛋白的单克隆抗体，是由保藏号为CCTCC NO：C2012156的杂交瘤细胞株4C8产生。 

所述单克隆抗体为IgG1,κ型。 

所述单克隆抗体由一个49.5KDa的重链和一个26.9KDa的轻链组成。