[发明专利]青蒿中青蒿素含量快速检测技术

说明书

技术领域

本发明涉及青蒿素快速检测技术。具体讲涉及通过索氏提取法快速从青蒿中提取青蒿素，并用高效液相色谱技术(HPLC)对青蒿素含量进行快速检测的技术。涉及化学检测技术领域。

背景技术

青蒿素是利用我国特有的植物资源青蒿研制成功的一种全新的抗疟有效单体。由于其结构独特，抗疟机理特别，对抗氯喹的恶性疟和脑性疟有特效，且有高效低毒的特点，而被WHO称为“世界上目前唯一有效的疟疾治疗药物”。青蒿素是一种白色针状晶体，分子式为C₁₅H₂₂O₅。1976年通过化学反应、光谱数据和X射线单晶衍射方法证明其为一种含有过氧基的新型倍半萜内酯。由于其具有特殊的过氧基团，它对热不稳定，易受湿、热和还原物质的影响而分解。

青蒿素是种具有过氧键和内酯环的倍半萜内酯，由于其不具有共扼结构，且化学性质不活泼，给定量测定带来一定困难。但自从青蒿素发现以来，经过科研工作者的不懈努力，已经发展出了一系列基于青蒿素各项物理化学性质的分析测定方法。但检测方法要与一定的分离提取方法相联系，才能有效地应用在研究、生产工作中。由传统的薄层色谱法、紫外分光光度法以及柱前衍生化-HPLC检测法向直接HPLC法检测过渡势在必行。

青蒿素有多个手性碳原子，使得合成步骤非常复杂，产率低、成本高，很难应用于工业化生产。所以目前药用青蒿素主要从青蒿植株中提取。因此，准确定量测定青蒿素含量，对于青蒿品种选育、青蒿素生产以及药理药效研究都有重要的意义。不同栽培条件和地理环境青蒿素含量差别很大，青蒿素生产企业收购农户青蒿时，需测定青蒿素含量，才能确定收购价格。青蒿干叶中提取青蒿素一般提取时间较长，需24h以上，检测方法也不成熟。由于收购时间比较集中，农户送来青蒿需等2-3周才能得到检测结果，在生产上极为不便，限制了产业的发展，本发明研究的青蒿素含量快速检测技术在青蒿素产业化开发中也具有重要价值和应用意义。

发明内容

本发明的目的是建立青蒿素高效液相色谱(HPLC)快速检测技术。

本发明的内容包括以青蒿为原料，通过索氏提取法快速提取青蒿素，确定高效液相色谱技术的色谱条件，建立青蒿素快速检测技术体系。

本发明建立的青蒿素快速检测技术体系，检测时间短(1h)，结果可靠，是适于青蒿素生产企业检测原料中青蒿素含量的成熟技术。

(1)从青蒿中提取青蒿素的索氏提取条件为：95％乙醇于65℃-85℃水浴，索氏提取提取时间为0.1-0.3h，0.3-0.5h，0.5-1h，1-2h，2-4h，4-8h。

(2)HPLC检测色谱条件为：色谱柱：Agilent Eclipse XDB C8柱(5μm，4.6×150mm)；流动相为以下配方选基一：乙睛∶醋酸缓冲液＝25∶75；乙睛∶醋酸缓冲液＝30∶70；乙睛∶醋酸缓冲液＝35∶65；温度：25-35℃；流速：1-2mL/min；波长：220nm。

本发明解决技术问题的方案分以下四个步骤完成：

(1)青蒿中青蒿素索氏提取：称取100g青蒿鲜样，研碎，将样品装入滤纸套筒中，把套筒小心地插入索氏提取器中，取300mL95％乙醇加入600mL平底烧瓶中，加入几粒沸石。水浴加热65℃-85℃，连续提取0.1-24h，分别在0.1-0.3h，0.3-0.5h，0.5-1h，1-2h，2-4h，4-8h，收集提取液，并以盐酸中和。

(2)样品提纯：提取液加热至70℃后经2％(w/v)活性炭脱色，搅拌30min，静置后以3000r/min离心10min后收集上清液，再用1/5体积的10％三氯乙酸除蛋白，以3000r/min离心去除变性蛋白，上清液真空蒸发浓缩。浓缩后的残渣以200mL70％乙醇沉淀，3000r/min离心后取上清液真空浓缩至30mL。

(3)HPLC检测：样品处理方法：1％醋酸水溶液99mL，加入1ml浓缩液，搅拌混匀后，取不同提取时间的提取液20μL做HPLC分析。标准曲线为：以峰面积(Y)与对照标准品浓度(X)进行线性回归，得回归方程为y＝2395.3x-1.3591，R＝0.987，根据回归方程计算出青蒿素浓度。

(4)取不同来源的青蒿干叶样品6份，重复5次，用(1)，(2)步骤方法提取后，用(3)步骤计算出提取0.1-0.3h；0.3-0.5h；1-2h；4-8h后青蒿素含量。

具体实施方式

在下面的实施例中进一步说明了本发明，这并不限制本发明的范围。

实施例1