[发明专利]一种测定它波宁含量的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种它波宁含量的高效液相色谱测定方法。

背景技术

它波宁(Tabersonine)是一种吲哚生物碱(结构式见附图1)，本身有小的降压活性，为合成一线抗脑缺血和老年痴呆药物长春胺、长春西汀和长春布宁的关键原料，是非常重要的药物合成中间体。该化合物天然来源于非洲产小灌木Voacanga africana果籽、还有夹竹桃科植物长春花和柳叶水甘草，所以又名柳叶水甘草碱。其中，以Voacanga africana种子中它波宁含量最高，达到2.0％-2.5％以上。Voacanga africana的其他部分如树皮和根皮除含有它波宁外，还含有大量其他生物碱如Voacangine，Vocamine，Vobtusine，Amataine，Akuammidine，Coronaridine和Vobtusine，它们均有良好的生理活性。

由于它波宁是Voacanga aficana种子中主要的生物碱(占生物总碱含量的95％以上，HPLC检测)，且含量高，所以目前天然它波宁的生产主要是从Voacanga aficana种子提取分离得到。关于它波宁的高效液相含量检测方法相关报道并不多，所以研究它波宁含量分析方法具有非常重要的意义。

该化合物天然来源于非洲产小灌木Voacanga africana果籽中，以Voacanga africana种子中它波宁含量最高可达2.0％-2.5％以上。黄色或淡黄色粉末，熔点199℃-199.5℃，比旋度-333°。溶于甲醇和乙醇，在水中微溶。研究表明，它波宁有抗肿瘤、降压作用，主要用于缺血性高血压脑病、中风后遗症及脑血管病引起的抑郁、焦躁不安等，适于早衰性脑退化症状的消除，如头痛、记忆力减退、眩晕、失语、记忆力减退等，也可用于视网膜出血。神经性心动过速和其他植物神经功能紊乱等症状。

目前，关于测定Voacanga aficana种子中它波宁含量的方法并不多，而且这些测定方法浓度与线性关系曲线中的浓度范围均较窄，本发明中浓度与峰面积线性关系中浓度范围最小可至10μg/ml，最大可达1000μg/ml，线性关系中浓度范围较大。本发明还具有分离效果好，测定准确，灵敏度高，分析简便快速等技术特点，对于准确测定原料药中它波宁的含量具有十分重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种更稳定、分离效果更好、精密度和准确性更高的它波宁含量检测方法。为达上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明方法选用了流动相中甲醇成分体积百分比由65％递增至85％。优选甲醇体积分数为70％。

在上述优化实验中，确定本发明方法中流动相成分含15％的乙腈和15％的0.2M的乙酸铵溶液。

本发明HPLC方法中，其特点在于选用上述的流动相，按上述流动相所得它波宁样品图谱有较好的峰形，图谱见附图2。

在本发明分析方法中，样品制备方法为：精密量取25mg样品，置于25ml容量瓶中，加流动相溶解稀释并定容至刻度线。

本发明HPLC分析方法进样量为10μl，利用标准品溶液多次进样来进行进样精密度试验，进样次数为6次，RSD值为0.12％，进样精密度良好。

附图说明

图1为它波宁结构式；

图2为它波宁图谱；

图3为它波宁标样浓度与峰面积线性关系。

具体实施方式：

在下面的实施例中进一步说明本发明的详细分析方法，但本发明并不局限于下述详细分析方法，所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

实施例1：它波宁含量的高效液相色谱方法1

色谱条件：

采用美国Agilem-1260高效液相色谱仪，Chemstation Edition色谱工作站

色谱柱：Thermo C18(4.6mm×250mm，5μm)

柱温：30℃

检测器：紫外检测器

检测波长：280nm

真空泵：SHB_III循环水式真空泵

流动相的制备：A溶液：称取7.72g乙酸铵(AR)，溶解在1000ml水(蒸馏水)中，醋酸调pH至4.0。流动相按照甲醇∶乙腈∶A溶液＝7∶1.5∶1.5体积比混合，0.2μm孔径过滤器过滤，SCQ-250W超声波超声脱气。

采用外标法，需要分别对标准品和待测样品溶液进行测定。