[发明专利]T细胞快速增殖方法

权利要求书

1.一种T细胞快速增殖方法，其特征是：包括下列步骤：

（1）配包被液：50ml离心管中加入D-PBS20ml，无菌细胞培养级超纯水溶解的纤维连接蛋白1-5μg共，混匀；将包被液加入T175培养瓶，平放，混匀，铝箔纸包好避光，4℃放置过夜； 

（2）将50ml抗凝血加到离心管，离心沉降，室温，上层为血浆层，下层为红细胞；

（3）自体血浆制备：收集离心的上层血浆层，56 ℃灭活，然后在4℃放置15分钟，最后900g×30min离心除去絮状沉淀，收集上清到另一支新的50ml离心管备用；

（4）加入D-PBS到离心的下层红细胞层中至50ml，混匀后平均加入已经分别添加20ml淋巴分离液的两个离心管，800g×15min离心；收获分离所得的淋巴细胞层细胞于另一支50ml离心管中，用RPMI1640加满到50ml，混匀，洗涤两次；离心洗涤后，使用负压器吸掉上清液，用40ml培养液重悬分离所得的淋巴细胞；

（6）将重悬的淋巴细胞悬液加入到洗涤过的T175培养瓶，加入含1%自体血浆的无血清T细胞培养液200ml，置于饱和湿度、37℃、 5.0% CO₂培养10-15天。