[发明专利]动物源细菌的酰胺醇类药物耐药基因四重PCR检测试剂盒

权利要求书

1.检测或辅助检测细菌中耐药基因的引物组，由引物对1、引物对2、引物对3和引物对4组成；

所述引物对1由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对2由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对3由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对4由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：

所述引物组中各条引物均为等摩尔比；

所述耐药为耐酰胺醇类药物；

所述耐药基因为floR基因、fexB基因、cfr基因和fexA基因中至少一种。

3.检测或辅助检测细菌中耐药基因的PCR试剂，由权利要求1或2所述的引物组、PCR扩增缓冲液和水组成；

所述引物组中的4种引物对中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.2μmol/L；

所述耐药为耐酰胺醇类药物；

所述耐药基因具体为floR基因、fexB基因、cfr基因和fexA基因中至少一种。

4.检测或辅助检测细菌中耐药基因的PCR试剂盒，包括权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂；所述耐药为耐酰胺醇类药物；

所述耐药基因具体为floR基因、fexB基因、cfr基因和fexA基因中至少一种。

5.权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测和/或辅助检测待测细菌是否含有耐药基因中的应用；

或权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂在制备检测和/或辅助检测待测细菌是否含有耐药基因产品中的应用；

或权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂在制备检测和/或辅助检测待测细菌是否耐酰胺醇类药物产品中的应用；

所述耐药为耐酰胺醇类药物；

所述耐药基因具体为floR基因、fexB基因、cfr基因和fexA基因中至少一种。

6.一种检测和/或辅助检测待测细菌是否含有耐药基因的方法，包括如下步骤：用权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述PCR试剂对所述待测样品进行四重PCR扩增，检测PCR产物；

若得到的PCR产物具有200bp大小，则待测细菌含有或候选含有floR基因；若得到的PCR产物不具有200bp大小，则待测细菌不含有或候选不含有floR基因；

若得到的PCR产物具有348bp大小，则待测细菌含有或候选含有fexB基因；若得到的PCR产物不具有348bp大小，则待测细菌不含有或候选不含有fexB基因；

若得到的PCR产物具有534bp大小，则待测细菌含有或候选含有cfr基因；若得到的PCR产物不具有534bp大小，则待测细菌不含有或候选不含有cfr基因；

若得到的PCR产物具有683bp大小，则待测细菌含有或候选含有fexA基因；若得到的PCR产物不具有683bp大小，则待测细菌不含有或候选不含有fexA基因。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于：

所述四重PCR扩增的退火温度为55℃；

所述检测PCR产物的方法为电泳检测或测序。

8.一种引物对，为如下4种中的任一种：引物对1、引物对2、引物对3和引物对4；

所述引物对1由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对2由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对3由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对4由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成。