[发明专利]一种新的欧米伽3的合成基因、含有合成基因的大肠菌及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因技术和微生物技术领域，涉及微生物制药领域中的基因工程菌株大肠菌sHJPF02。

 

背景技术

欧米伽3脂肪酸的学名叫做Ω－3脂肪酸，其功用在20世纪20年代就逐渐被发现，当时被称为“维生素F”，近30年内的研究表明，欧米伽3是人体正常生长发育和新陈代谢必需的不饱和脂肪酸，主要含有DHA、EPA和DPA这三种极为重要的生理物质。欧米伽3主要具有以下功效：维护视网膜功能和延缓脑的衰老；促进婴幼儿智力开发和智商提高，增强记忆力；预防心脑血管疾病；抗炎、抑制过敏反应。EPA最重要的功能是具有抗血栓形成、调节血脂、降血压等作用，从而具有预防心血管疾欧米伽3病的作用；DHA俗称脑黄金，最重要的功能是参与脑细胞的形成和发育，添加DHA对促进出生后脑容量发育具有重要意义；DPA 的功效是DHA的十倍以上，且DPA 对幼儿的生长是至关重要的。

加拿大政府最近向25-49岁的国民建议每日应服用1.5-3克的欧米伽3；2004年美国FDA批准欧米伽3脂肪酸治疗高甘油三脂血症的成人患者；最近美国卫生部已同意每日对欧米伽3的吸取量应增加为3克；世界卫生组织（WHO）最近建议成年人欧米伽3每天增加3克的吸收量（必须补充）。2010年欧米伽3的全球市场销售额约38亿美元，大部分来自于海洋鱼类提取法，以深海鱼油的形式出售，其余来自于微生物发酵法，主要是作为食品添加剂加入婴幼儿奶粉、牛奶和其它食品之中。

本发明提供了3个欧米伽3的合成基因和一株生产欧米伽3的基因工程菌株大肠杆菌sHJPF02，该菌株遗传性状稳定，可以生产EPA和DPA，培养和发酵条件适合于工业化生产。

 

发明内容

发明目的

提供了3个欧米伽3的合成基因和一株生产欧米伽3的基因工程菌株大肠杆菌sHJPF02，该菌株遗传性状稳定，可以生产EPA和DPA，培养和发酵条件适合于工业化生产。

技术方案

欧米伽3的合成基因1，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 1。

欧米伽3的合成基因2，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 2。

 

欧米伽3的合成基因2，其核苷酸序列为SEQ ID NO. 3。

该菌株通过将欧米伽3的合成酶基因1-3利用生物工程的方法导入大肠杆菌BL21得到，可以生产EPA和DPA，命名为sHJPF02，分类名为大肠埃希氏菌，Escherichia coli，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所。

一株生产欧米伽3的基因工程菌株构建的方法，将具有SEQ ID NO. 1序列的DNA克隆到质粒pETDeut-1中得到质粒pHJPF01；将具有SEQ ID NO. 2序列的DNA克隆到质粒pACYCDeut-1中得到质粒pHJPF02；将具有SEQ ID NO. 3序列的DNA克隆到质粒pCOLADeut-1中得到质粒pHJPF04；将pHJPF01、pHJPF02和pHJPF04同时导入大肠杆菌BL21得到一株基因工程菌株sHJPF02，该菌株可以生产EPA和DPA。

本发明的有益效果：提供了一株生产欧米伽3的基因工程菌株，该菌株生产EPA的产量稳定在1.0 g/L左右，DPA的产量稳定在0.3 g/L左右，相比于欧米伽3的原始生产菌株，该菌株生长速度快，欧米伽3的产量高，遗传性状稳定，适合于在工业化生产欧米伽3。

该菌株命名为sHJPF02，分类名为大肠埃希氏菌，Escherichia coli，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）保藏日：2013年3月20日，保藏登记号：CGMCC No. 7338，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所。

 

附图说明

图1是质粒pHJPF01的构建示意图（A）、质粒pHJPF02的构建示意图（B）和pHJPF04的构建示意图（C）。

图2是质粒pHJPF01用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（A）、质粒pHJPF02用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（B）和质粒pHJPF04用限制性内切酶NdeI/XhoI消化的电泳图（C）。

 

具体实施方式