[发明专利]一种检测食品中脂肪酸氯丙醇酯单双酯含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测食品中油脂的方法，尤其是一种利用气相色谱-质谱联用仪检测食品中脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇单酯，脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇二酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇单酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇二酯四类酯含量的方法。

背景技术

氯丙醇是熟知的食品加工过程污染物，尤其是3-氯-1,2-丙二醇（简称3-MCPD），因其具有肾脏毒性、生殖毒性、免疫抑制和潜在致癌性等作用而被广泛关注，而脂肪酸氯丙醇酯（氯丙酯）是氯丙醇与脂肪酸酯化而形成的一类物质，是近年来国际上新出现的食品安全问题，尤其在油脂类食品中脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇酯（简称3-MCPD酯）的污染最为严重。目前3-MCPD酯的毒性仍不十分清楚，对其健康风险的担心主要是因为氯丙酯的水解产物有多种毒性，因此，氯丙酯的水解增加了3-MCPD的暴露水平，摄入量可能是3-MCPD的暂定每日最大耐受量的5～100倍。3-MCPD酯具有3-MCPD单酯和双酯两种异构体，结构上的差异可能导致毒理学作用的差异。Manliu等以大鼠进行试验，发现3-MCPD二酯会致使大鼠精子减少（即具有生殖毒性），而3-MCPD单酯不但与3-MCPD二酯同样具有生殖毒性，还会使大鼠肾小管坏死（即肾脏毒性）。在模拟肠道模型的脂肪酶水解试验中发现，3-MCPD单酯水解成3-MCPD的速率远远超过3-MCPD二酯的速率。鉴于此，有必要建立对3-MCPD单/双酯分别进行分离和检测的方法，获得食品中3-MCPD单酯、双酯的比例，从而有助于更精确地对3-MCPD酯的健康风险进行评估。

目前国际上以水解法间接测定脂肪酸氯丙醇酯总量的研究报道已经较多，但对食品中脂肪酸氯丙醇单/双酯含量分别检测的研究甚少， Seefelder等人利用氨丙基（aminopropyl）固相萃取法，以不同比例的正己烷、乙醚、二氯甲烷以及乙酸乙酯的混合液洗脱，将3-MCPD单酯与双酯分离，再结合GC-MS分别检测各自的含量，由于所用溶剂种类多，溶剂比例复杂，操作非常繁琐（Janis C , Owen W P , Ray H L , et al. Jr. J. Agric. Food Chem. 1984, 32(3), 474-476.）；Zelinková等人利用硅胶固相萃取法，采用不同比例的石油醚与乙醚混合溶剂进行洗脱分离MCPD单/双酯，然后结合GC-MS进行分析，但其缺点是所需洗脱溶剂比例多，且消耗溶剂体积多达850 ml，操作繁琐，灵敏度低，且对仪器污染严重（Zuzana Z , Doleqal M, Jan V. Eur Food Res Technol . 2009, 228:571–578.）。

为克服上述缺点，本发明采用氨基固相萃取柱，利用正己烷－乙酸乙酯混合溶剂洗脱，并采用碱水解－苯基硼酸衍生化的GC-MS法来测定脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇单酯，脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇二酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇单酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇二酯含量。

发明内容

本发明采用气相色谱-质谱联用仪来检测食品脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇单酯，脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇二酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇单酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇二酯四类单酯或双酯，包括以下步骤：

（一）样品的处理

称取待测食物样品适量于塑料离心管中，加入混合内标溶液，超声混合均匀，其中脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇单酯，脂肪酸3-氯-1,2-丙二醇二酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇单酯，脂肪酸2-氯-1,3-丙二醇二酯所对应的内标分别为d₅-棕榈酸3-氯-1,2-丙二醇单酯、d₅-棕榈酸3-氯-1,2-丙二醇二酯、d₅-硬脂酸3-氯-1,3-丙二醇单酯、d₅-硬脂酸3-氯-1,3-丙二醇二酯；

（二）萃取分离

上柱：将混合均匀的样品和内标溶液，转入经正己烷活化后固相萃取柱中，并两次以正己烷洗涤离心管，将洗涤液一并转入固相萃取柱中，固相萃取柱的填料为氨基填料、硅藻土中的一种或者混合物，填料的重量为0.5g至5.0 g之间，其中氨基填料的粒度为50目至400目之间；