[发明专利]可产生三维立体图像的光学显微成像方法

权利要求书

1.可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）镜头选择：根据待观察的样品选取合适的物镜以及比此物镜NA值小的聚光镜，所述聚光镜需能产生环形照明光，将选取好的镜头分别安装在显微镜的物镜转盘和聚光镜平台上；

（2）样品制备：将样品固定在载物台上；

（3）样品聚焦：打开显微镜，利用单一光源通过聚光镜在样品周围制造环形照明光，先调节聚光镜，将光斑聚焦到样品上，再调节物镜，使其聚焦到样品上；

（4）衬度调节：此时可观测到样品的三维立体光学显微图像，通过微调聚光镜在样品上的聚焦深度，或通过调节光阑及挡光片的尺寸，或选择NA值差别不同的物镜及聚光镜组合，或使用空间光调制器，可调节样品暗场光在收集光中的比例，实现衬度调节，可使被观察的样品形成衬度高、立体感强、细微结构表现丰富、边界清楚的三维立体图像。

2.如权利要求1所述的可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于在步骤（1）中，所述聚光镜为暗场聚光镜或普通聚光镜搭配挡光片。

3.如权利要求1所述的可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于在步骤（3）中，所述单一光源为白光光源或单色光源。

4.如权利要求3所述的可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于所述单色光源为激光光源。

5.可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）镜头选择：根据待观察的样品选取合适的物镜；

（2）样品制备：将样品固定在载物台上；

（3）样品聚焦：打开显微镜，利用单一光源产生入射光，调节物镜使其光斑聚焦到样品上；

（4）挡光片放置：将尺寸合适的挡光片放置在入射光路中的孔径光阑处以挡住入射光中心，产生环形照明光；

（5）衬度调节：通过调整光阑的大小，即可观测到样品的三维立体显微成像；通过调整光强度使三维立体显微图像明亮清晰，可通过缩小孔径光阑的大小，或通过使用挡光面积更大的挡光片，或使用空间光调制器来调节样品暗场光在收集光中的比例，提高成像的衬度，如果光线过暗，且图像中心出现黑斑，则选择挡光面积更小的挡光片。

6.如权利要求5所述的可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于在步骤（3）中，所述单一光源为白光光源或单色光源。

7.如权利要求6所述的可产生三维立体图像的光学显微成像方法，其特征在于所述单色光源为激光光源。