[发明专利]一种具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法

权利要求书

1.一种具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，包括：

(1)巯基十一酸根保护的纳米金的制备；

(2)将步骤(1)获得的巯基十一酸根保护的纳米金与内切酶连接制备所述具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料；

其中，步骤(1)具体包括如下步骤：

(1-1)将纳米金胶体用氮气吹扫脱气10-60秒；

(1-2)将脱气后的纳米金胶体分散于含有吐温20的磷酸缓冲溶液中，稳定至少20分钟，然后加入巯基十一酸水溶液，常温下静置2-4小时，获得混合液；其中，纳米金胶体与巯基十一酸的摩尔比为1∶(100-200)；

(1-3)将步骤(1-2)获得的混合液离心分离，去除上层清液后，将沉淀溶于磷酸缓冲溶液中，超声分散；

(1-4)重复步骤(1-3)的离心、去清、重悬过程，直至上层清液中不含巯基十一酸，将离心收集到的巯基十一酸根保护的纳米金分散于磷酸缓冲溶液中备用；

步骤(2)具体包括如下步骤：

(2-1)将步骤(1)中获得的巯基十一酸根保护的纳米金的磷酸缓冲溶液与1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐EDAC、N-羟基琥珀酰亚胺NHS以及内切酶加入到2-(N-吗啉代)乙磺酸MES缓冲溶液中，常温静置反应2-4小时，获得混合液；

(2-2)将步骤(2-1)获得的混合液离心分离，去除上层清液后，将沉淀溶于磷酸缓冲溶液中，超声分散；

(2-3)重复步骤(2-2)的离心、去清、重悬过程，直至上层清液中不含EDAC、NHS、MES以及内切酶；

(2-4)离心分离，收集具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料，将获得的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料分散于磷酸缓冲溶液中即可。

2.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1-2)中，分散于含有吐温20的磷酸缓冲溶液中的纳米金胶体的浓度为5-10nmol/L。

3.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1-2)中，含有吐温20的磷酸缓冲溶液中，吐温20浓度为0.1-1mg/mL；巯基十一酸水溶液中巯基十一酸的浓度为1-10mmol/L。

4.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1-4)中，分散于磷酸缓冲溶液中的巯基十一酸根保护的纳米金的浓度为4-5nmol/L。

5.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(2-1)混合液中所加入的EDAC和NHS的摩尔比为1∶(1-5)；步骤(2-1)混合液中2-(N-吗啉代)乙磺酸MES的浓度为5-20mmol/L。

6.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(2-1)混合液中，巯基十一酸根保护的纳米金的浓度为2-3nmol/L，内切酶的浓度为1000-5000U/mL。

7.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(2-4)中，分散于磷酸缓冲溶液中的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的浓度4-5nmol/L。

8.如权利要求1所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1-2)、(1-3)、(1-4)、(2-2)和(2-4)中所用缓冲溶液为磷酸缓冲溶液，其溶质浓度为5-20mmol/L。

9.如权利要求1-8任一所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法，其特征在于，所述内切酶为限制性内切酶，选自EcoRI核酸内切酶、Nt.AlwI切刻内切酶、EcoRV内切酶、SmaI内切酶、BamHI内切酶、HhaI内切酶、XcmI内切酶和BbvCI内切酶。

10.一种具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料，为根据权利要求1-9任一所述的具有酶催化性能的纳米金-蛋白质复合材料的制备方法制得。