[发明专利]一种绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1及其编码序列的基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子遗传学领域，尤其是一种绿臭蛙抗菌肽及编码序列的基因与应用。 

背景技术

随着青霉素等传统抗生素的大规模和不恰当使用，微生物对传统抗生素产生了越来越强的耐受性，在临床上已经出现了大量能够完全耐受青霉素等传统抗生素的微生物，已有的抗生素对这些病原微生物无能为力。抗菌肽是一种新型的抗微生物多肽，大多数抗菌肽分子量小于10000 Da，带正电，富含疏水碱基，能够形成两亲性的结构。抗菌肽的杀菌机制主要是通过静电相互作用吸引并结合到带负电的细菌细胞膜表面，进一步在细菌细胞膜上形成跨膜的孔洞，导致细菌细胞内容物的外泄，从而导致细菌细胞的死亡。而传统抗生素主要是作用于细菌细胞内的一些酶类。正是由于作用方式的不同，抗菌肽介导的杀菌作用远远快于传统抗生素，并且不易使细菌产生耐受性。除此之外，越来越多的文献报道表明抗菌肽还具有其他的杀菌机制，如抑制细菌细胞壁合成、改变细菌细胞质膜抑制隔膜形成、激活自溶素、抑制细胞内酶活性、抑制DNA、RNA和蛋白质的合成等。 

两栖动物皮肤抗菌肽具有高效、广谱、不易产生耐药性等特点。这使其在耐抗生素病原菌株大量涌现的今天有望成为新一代的临床抗菌药物。抗菌肽可以识别革兰氏阴性菌脂多糖、革兰氏阳性菌胞壁酸和细菌未甲基化CpG DNA等细菌信号分子，并因为其特殊的氨基酸结构、两亲性、阳离子特性及小分子特征等，可以较为容易粘附磷脂双分子层，并以“桶-板模式”、“覆毯模式”、“胶束模式”等方式插入细菌的细胞膜，从而在细胞膜上形成穿膜孔道，引起胞内物质外漏，最终导致菌体的死亡。研究表明，两栖类皮肤抗菌肽odorranain-H家族对金黄色葡萄球菌等细菌有一定得抑制效果，可通过多种不同的机制发挥作用，如有的在细菌内形成片层样的囊泡状结构，有些可能导致细胞质壁的分离，有些在细菌的膜上形成穿孔，有些则导致了细菌染色质的固缩。因此，在医药领域和食品防腐具有一定的开发前景。 

两栖类动物作为水生和陆生动物的中间类群，其生活环境恶劣，容易滋生各种病原微生物。为了避免微生物感染，两栖类动物进化出强大的先天免疫系统，用以抵抗病原微生物的侵袭。其中抗菌肽是两栖类动物先天免疫系统中的重要组分，在两栖类动物抵御外界微生物侵袭过程中发挥了重要的作用。到目前为止，已从各种两栖类动物中发现大量抗菌肽，这些抗菌肽具有不同的结构和抗菌活性，是新型多肽类抗微生物药物开发的优良模板库。目前，国外对多种两栖类抗菌肽进行了研究开发，已有多种进入临床试验阶段。如来源于非洲爪蟾抗菌肽magainin的改造体MSI-78对糖尿病患者的足部溃疡有显著疗效且副作用小，已进入临床Ⅲ期试验阶段。 

绿臭蛙（Rana margaratae)属于两栖纲无尾目蛙科臭蛙属。目前关于绿臭蛙形态、发育和分子进化已有报道，但是关于绿臭蛙抗菌肽的研究还没有报道。 

发明内容

技术要求 

本发明所要解决的技术问题是提供一种绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1。

本发明还要解决的技术问题是提供上述蛋白的编码序列。 

本发明还要解决的技术问题是提供上述蛋白在制备抗氧化药物或化妆品添加剂的应用。 

本发明是这样实现的：一种绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1，它是具有序列表中SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的蛋白，或者是将SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列经过一个以上氨基酸残基的取代、缺失或添加，且具有与SEQ ID NO：2的氨基酸残基序列相同活性的由SEQ ID NO：2衍生的蛋白质。 

所述的绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1具有序列表中SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；该绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1为环状多肽，含有21个氨基酸残基，分子量为2044.58   Da，等电点为8.90。 

绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1的编码基因，它是下列核苷酸之一： 

（1）序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

（2）编码序列表中SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的多核苷酸；

（3）在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID NO：1限定的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1的编码基是序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。 

绿臭蛙抗菌肽odorranain-H-OM1在制备抗微生物药物中的应用。

有益效果