[发明专利]采用固相支持物纯化DNA的制剂和方法

说明书

本申请是国际申请PCT/US2005/027419，国际申请日2005年8月2日，中国国家阶段申请号200580025930.1，名称“采用固相支持物纯化DNA的制剂和方法”的发明专利申请的分案申请。

关于联邦资助的研究或开发的说明

有关本文件的工作受到国立卫生研究院资金1 R43 CA106124-01的支持。美国政府对本发明拥有一定权利。

对相关专利申请的交互参考

本文件要求2004年8月2日提交的美国专利申请序号10/909，724的优先权，该申请是2003年4月16日提交的美国专利申请序号10/418，194的部分延续，而后者是2001年10月12日提交的美国专利申请序号09/947，798的延续，这些申请均通过援引于本文而纳入。

发明背景

在分子生物学领域，核酸如脱氧核糖核酸DNA)和核糖核酸(RNA)已广泛用于研究和临床分析。已有许多核酸纯化方法，包括二种通用类型的液相和固相纯化方法。液相纯化时，DNA留在液相中而杂质通过沉淀和/或离心被除去。固相纯化时，DNA结合于固相支持物而杂质被选择性洗脱。常规的液相和固相纯化方法需要采用许多步骤和有害的试剂。

本发明一些实施方式的概述

本文描述一种分离和/或纯化核酸的制剂。该制剂含有浓度至少约1M的锂盐、至少一种表面活性剂和缓冲液。该制剂还含有螯合剂如EDTA或柠檬酸盐。该制剂不含离液剂和/或强离液物质。强离液物质的例子有胍盐、尿素、铵盐、铯盐、鉫盐、钾盐或碘盐。该制剂中的锂盐可以是氯化锂。锂盐的浓度可以是2M-10M，或2M-6M。在某些实施方式中，锂盐的浓度可以是2M、3M、4M、5M、6M、7M、8M、9M或10M，或上述二种浓度之间的任何范围(如5.5M)。该制剂的pH约高于7，例如在约7-9之间(如pH8、8.5、9)。在某些实施方式中，所分离和/或纯化的核酸是DNA。

此制剂中的表面活性剂浓度约占制剂总体积的10-40%(或其间的任何百分比)。此组合物中的表面活性剂可以是去污剂。所述去污剂可以是阴离子、阳离子、两性离子或非离子去污剂。在一实施方式中，表面活性剂是非离子去污剂。合适的非离子去污剂的例子包括：Tween、Triton、Nonidet、Igepal或Tergitol。例如，去污剂可以是Triton-X。表面活性剂还可以是二甘醇单乙醚(DGME，diethyl glycol monoethyl ether)。DGME的浓度占此制剂总体积的约5-35%(或此二百分比之间的任何百分比)。总之随着该制剂其它组分浓度的增加DGME的用量也增加，从而可提高其它组分的溶解度。在某些实施方式中，表面活性剂是Triton-X与DGME的混合物。在一实施方式中，表面活性剂是5%v/v Triton与5%v/v DGME的混合物。在一实施方式中，表面活性剂的浓度占此制剂终体积的约10%v/v。

在一实施方式中，表面活性是阴离子去污剂。合适阴离子去污剂的例子包括十二烷基硫酸钠(SDS)或N-十二烷酰肌氨酸。在一实施方式中，SDS是阴离子去污剂。在一实施方式中，去污剂的浓度在约0.05-0.2%之间(和此间的任何百分比)。在一实施方式中，其浓度约为0.1%。

在某些实施方式中，该制剂含有浓度为0.1%SDS和30%DGME的一种以上表面活性剂的混合物。

该制剂中的缓冲液的pKa至少约为8。螯合剂可以是EDTA或柠檬酸盐。

在一实施方式中，用于分离和纯化核酸的该制剂含有至少约1M浓度的锂盐、表面活性剂、缓冲液和任选的螯合剂，其中该溶液的pH约为7。

在另一实施方式中，用于分离和纯化核酸的该制剂基本上由至少约1M浓度的锂盐、至少一种表面活性剂、缓冲液和任选的螯合剂组成。

在还有一种实施方式中，该制剂基本上由锂盐、至少一种表面活性剂、缓冲液和任选的螯合剂组成，该制剂的pH约为7。

另一实施方式该制剂基本上由至少约1M浓度的锂盐、表面活性剂、缓冲液和任选的螯合剂组成，pH约为7。