[发明专利]一种江西铅山红芽芋多倍体诱导的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种植物新品种选育方法，确切地说是江西铅山红芽芋多倍体的一种诱导方法。

背景技术：

江西铅山红芽芋皮色鲜艳，顶芽红色，肉质细嫩，易煮烂而不糊，营养丰富，含多种微量元素，是芋中之珍品，一直是国内外市场上紧俏的抢手货，是铅山县的拳头产品。目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，江西铅山红芽芋品种普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，优良品种的选育已成为江西铅山红芽芋生产急需解决的问题。多倍体一般具有生长旺盛、产量高、适应性和抗逆性强等特点，且能够利用无性繁殖的方式固定其优良性状，使之保持稳定而不分离，所以多倍体育种一直被认为是创造蔬菜新品种的重要途径。本研究以江西铅山红芽芋为试材，通过秋水仙素诱变技术，获得红芽芋多倍体新种质，并从细胞学方面对其进行鉴定，对充分发挥和利用我国地方红芽芋资源优势，保护、开发我国道地蔬菜和丰富特色蔬菜种类有重要意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一种品质优良和抗逆性强的一种红芽芋多倍体诱导方法。实现本发明目的的技术方案是，一种江西铅山红芽芋多倍体诱导方法，其特征在于有以下步骤：(1)江西铅山红芽芋单芽用不同浓度秋水仙素(0％、0.01、0.02、0.05％、0.1％、0.2％)浸泡不同时间(12h、24h、48h、72h、96h)；(2)无菌水冲洗后，将红芽芋单芽分别接种在MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基上培养，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃；(3)培养60d后，将形态上发生明显变异的红芽芋单芽切下来，并接种到MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基上，继代培养3-4次后，即可得到江西铅山红芽芋多倍体丛生芽，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃；(4)当多倍体丛生芽长到2-3cm时，可将单芽切下来转接至生根培养基1/2MS+NAA0.1-0.5mg/L中培养，即可得到江西铅山红芽芋多倍体试管苗，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃。本发明与现有技术比较，诱导的多倍体红芽芋品质优良且抗逆性较强。

具体实施方式：

结合下述实施例对本发明作进一步说明：

(1)江西铅山红芽芋多倍体的诱导

江西铅山红芽芋单芽用不同浓度秋水仙素(0％、0.01、0.02、0.05％、0.1％、0.2％)浸泡不同时间(12h、24h、48h、72h、96h)；无菌水冲洗后，将红芽芋单芽分别接种在MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基上培养，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃；培养60d后，将形态上发生明显变异的红芽芋单芽切下来，并接种到MS+KT2mg/L+NAA0.5mg/L固体培养基上，继代培养3-4次后，即可得到江西铅山红芽芋多倍体丛生芽，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃；当多倍体丛生芽长到2-3cm时，可将单芽切下来转接至生根培养基1/2MS+NAA0.1-0.5mg/L中培养，即可得到江西铅山红芽芋多倍体试管苗，培养条件为：光照时间14h/d，光强约1500-2000lx，培养温度25±2℃。培养60d后对试管苗进行形态学观察，初步确定0.1％的秋水仙素处理红芽芋从生芽72h，诱导率为20.5％，诱导效果最好。

(2)多倍体的形态鉴定

多倍体试管苗与对照试管苗相比，其植株变矮、叶片大而长、叶色更加浓绿，根短且粗壮，根据这些形态指标对多倍体植株进行初筛。

(3)多倍体的气孔鉴定

分别取多倍体试管苗与对照试管苗全展叶片，采用印迹法观察其气孔，即在植物叶的表面涂抹醋酸纤维素胶液，风干后的薄膜置于载玻片上，加盖玻片制片，在显微镜下随机测量气孔保卫细胞的长和宽，取其平均值，结果发现多倍体试管苗气孔的保卫细胞长宽均变大，但气孔密度显著下降。

(4)多倍体的染色体鉴定

分别取多倍体试管苗与对照试管苗的根尖进行染色体观察。采用改良苯酚品红染色法制片，在光学显微镜下观察并拍照。结果发现，对照试管苗的染色体数目是2n＝28，多倍体试管苗的染色体数目是2n＝56，这表明通过诱导获得了四倍体。