[发明专利]一种抗StxⅡ单克隆抗体

权利要求书

1.一种志贺毒素的单克隆抗体或其片段，包括轻链CDR1-3和重链CDR1-3，其特征在于，所述轻链CDR1-3的氨基酸序列为∶

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：8所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：9所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：10所示；

所述重链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：5所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：6所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：7所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其片段，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.如权利要求1-2任意一项所述的单克隆抗体或其片段，其特征在于，所述轻链可变区的编码序列如序列表中SEQ ID NO：3的核甘酸序列所示，所述重链可变区的编码序列如序列表中SEQ ID NO：1的核甘酸序列所示。

4.权利要求1-3中任意一项所述的单克隆抗体或其片段在制备检测StxII试剂盒中的应用。

5.权利要求1-3中任意一项所述的单克隆抗体或其片段在制备治疗StxII所引起疾病的药物中的应用。

6.权利要求1-3中任意一项所述的单克隆抗体或其片段在制备纯化志贺毒素的试剂中的应用。

7.一种纯化志贺毒素的方法，包括以下步骤：

1)称量1g柱层析填料CNBr-activated Sepharose4B(GE Healthcare)至2mM HCl中溶胀，然后用2mM HCl充分洗涤。

2)把5ml溶于偶联缓冲液(0.2M NaHCO₃，0.4M NaCl)浓度为10mg/ml的单克隆抗体S2D8和S1D8分别与溶胀的柱填料混合，4℃过夜。

3)用偶联缓冲液洗去多余的抗体分子，柱填料中多余的活性基团则用0.1MTris-HCl封闭，室温作用2小时，抗体-填料偶联物先用0.2M醋酸钠缓冲液(含0.5M NaCl)洗涤，然后用0.2M Tris-HCl缓冲液(含0.5M NaCl)洗涤，轮流洗3个循环。

4)将上述第3)步得到的填料装柱，用平衡缓冲液(50mM Tris-HCl)4℃平衡过夜。

5)制备StxII粗提物，将StxII粗提物上样，流速为2ml/min。

6)用平衡缓冲液(50mM Tris-HCl)洗至基线，用5个柱床体积洗脱缓冲液(0.1M Glycine-HCl)洗脱，收集洗脱峰。

7)用中和液(1M Tris-HCl pH9.0)调节pH至7.0。把纯化的毒素蛋白用透析袋透析至PBS中，测浓度。