[发明专利]绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种发酵培养方法，具体涉及绣线菊内生真菌的抗菌发酵液的制备方法。

背景技术

随着社会的发展及人类对环境和生态认识的提高，人们对农药的认识程度也越来越深，认识到人类不但需要农药，而且意识到合成农药的广泛使用会带来很大的弊病。在保护生态环境的大背景下，生物防治异军突起，而作为生物防治重要内容的农用抗生素，由于其合成农药无法比拟的优越性，已越来越受到人们的重视。由于微生物农药具有对环境安全、无公害、无残留、不易产生抗性、生产成本低、发酵工艺简单、对非靶标生物安全等特点，在开展生物防治中将大显身手。作为微生物农药来源之一的植物内生真菌(Endophytic fungi)与宿主植物具有协同进化作用，它们已经形成互惠共生关系。一方面宿主植物本身产生的光合产物可为内生真菌提供足够的营养供其生长，另一方面内生真菌产生的代谢产物常包含一些促生及抗菌的活性物质，促进植物生长发育，提高植物抗逆境，抗胁迫和抗病害能力。因此，植物内生真菌的次生代谢产物可以作为新化合物、新药物筛选的潜在或替代资源，从而可以有效降低新药物或其它用途活性物质的研发成本。

绣线菊属蔷薇科绣线菊亚科绣线菊属(Spiraea) 落叶直立灌木，主要分布于北温带地区。我国拥有丰富的绣线菊属植物资源,是该属的现代分布和分化中心，且物种的多样性和丰富度都很高。其根、叶、果实可作兽药，配以它药可治痈肿疮疡、咽喉肿痛、风热痒症，在民间具有悠久的应用历史。苗医在治疗消化系统疾病时也把绣线菊作为常用药。根据植物内生真菌内共生理论，绣线菊很有可能存在着特殊的内生真菌，能够产生特殊的具有抗菌活性的天然成分，为新型“绿色”农药提供理论依据和物质基础。目前，国内外对绣线菊内生真菌对植物病原菌抑菌活性的研究报道较少。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有较强的抑制植物病原真菌活性的绣线菊内生真菌抗菌发酵液的制备方法。

本发明所述的绣线菊内生真菌命名为链格孢菌XXB07（Alternaria sp. XXB07），保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2013年3月08日，保藏编号为CGMCC No.7292；

本发明所描述的绣线菊内生真菌系从中国安徽省合肥市绣线菊 (Solidgo canadensis)植物活体中分离得到的。

绣线菊内生真菌序列与Genbank数据库已知序列比对后，通过MEGA5.0软件构建系统发育树该菌为链格孢属，故命名为链格孢菌XXB07（Alternaria sp. XXB07），菌株ITS基因序列如下：

1        AAACCATGCT GCTGGACTCT CGGGGTTACA GCCTTGCTGA ATTATTCACC

51       CTTGTCTTTT GCGTACTTCT TGTTTCCTTG GTGGGTTCGC CCACCACTAG

101      GACAAACATA AACCTTTTGT AATTGCAATC AGCGTCAGTA ACAAATTAAT

151      AATTACAACT TTCAACAACG GATCTCTTGG TTCTGGCATC GATGAAGAAC

201      GCAGCGAAAT GCGATAAGTA GTGTGAATTG CAGAATTCAG TGAATCATCG

251      AATCTTTGAA CGCACATTGC GCCCTTTGGT ATTCCAAAGG GCATGCCTGT

301      TCGAGCGTCA TTTGTACCCT CAAGCTTTGC TTGGTGTTGG GCGTCTTGTC

351      TCTAGCTTTG CTGGAGACTC GCCTTAAAGT AATTGGCAGC CGGCCTACTG

401      GTTTCGGAGC GCAGCACAAG TCGCACTCTC TATCAGCAAA GGTCTAGCAT

451      CCACTAAGCC TTTTTTTCAA CTTTTGACCT CGGATCAGGT AGGGATACCC

501      GCTGAACTTA AGCATATCAA TAAGCGGAGG AA

本发明绣线菊内生真菌抗植物病原菌发酵液的具体发酵制备操作步骤如下：