[发明专利]一种检测苯乙醇胺A含量的方法及检测试剂盒

权利要求书

1.苯乙醇胺A半抗原，其具有式（I）所示的结构式：

2.苯乙醇胺A抗原，其为权利要求1所述的半抗原与载体蛋白偶联复合物。

3.苯乙醇胺A抗体，其为权利要求2所述的抗原作为免疫原免疫动物制得。

4.苯乙醇胺A检测试剂盒，其包含权利要求2所述的抗原和/或权利要求3所述的抗体。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，其包括：包被权利要求2所述抗原的酶标板，权利要求3所述的抗体；以及选自以下试剂的一种或多种：

A） 酶标二抗；

B） 底物液；

C） 终止液；

D） 标准品溶液；

E） 封闭液；

F） 洗涤液。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述抗原为权利要求1所述的半抗原与牛血清白蛋白或卵清白蛋白的偶联复合物；所述抗体为权利要求1所述的半抗原与牛血清白蛋白或卵清白蛋白的偶联复合物为免疫原制得的多克隆抗体；所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG；所述底物液为TMB溶液；所述终止液为H₂SO₄溶液；所述标准品溶液为苯乙醇胺A溶液；所述封闭液为酪蛋白溶液；所述洗涤液为PBST缓冲液。

7.权利要求4～6任一项所述的检测试剂盒在检测苯乙醇胺A中的应用。

8.一种检测苯乙醇胺A含量的方法，该方法包括如下步骤：

(a).加入权利要求2所述的抗原于酶标板中，50-200ng/孔，，每孔200μL，冰箱4℃过夜；

(b).用PBST缓冲液，以350μL/孔，洗板三次；

(c).加入酪蛋白进行封阻，每孔300μL，室温保温保湿放置1小时；

(d).用PBST缓冲液洗板三次；

(e).在酶标板的每孔中依次分别加入100μL苯乙醇胺A标准品溶液和100μL1:10000至1:50000稀释的抗体，室温保温保湿放置1小时；

(f).用PBST缓冲液洗板三次；

(g).加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG，每孔200μL，室温保温保湿放置1小时；

(h).用PBST缓冲液洗板三次；

(i).加入底物溶液，每孔200μL，室温保温保湿避光反应，在微量振荡器上振摇约15～25分钟；

(j).加入5%H₂SO₄溶液，每孔50～100μL，终止酶反应；

(k).用酶标仪测定吸光度；

(l).按照(a)至(k)的步骤在步骤(e)中将标准品溶液替换为样品溶液，测定样品溶液吸光度，根据标准品的标准曲线和样品溶液的吸光度得到样品溶液苯乙醇胺A含量。

9.制备权利要求1所述苯乙醇胺A半抗原的方法，该方法是将苯乙醇胺A溶于无水乙醇中，升温至80℃后加入水合肼、钯碳，氮气保护条件下80℃回流反应得到。

10.制备权利要求2所述苯乙醇胺A抗原的方法，该方法是将权利要求1所述的苯乙醇胺A半抗原溶解于水中，缓慢滴加NaNO₂溶液，并用盐酸调pH值为1.5，暗处4℃反应1～10小时，经初步测定重氮化完成之后，缓慢滴加尿素溶液终止反应，将上述重氮化溶液逐滴加入到0.01～0.02%的载体蛋白溶液中，调节pH为6～9，4℃缓慢搅拌1～10小时，透析1～5天即得。