[发明专利]一种淋巴细胞白血病分子标志物应用于制备治疗制剂的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学与临床医学技术领域，涉及一个与淋巴细胞白血病发生、诊断和治疗相关的分子的应用方法。

背景技术

STIP（septin and tuftelin interacting proteins），又名TFIP11（Tuftelin-interacting Protein11），位于人类染色体22q12.1，是一种具有G-patch结构域，卷曲螺旋和几个短的色氨酸-色氨酸重复序列，该蛋白的基因序列在genebank中的登录号为NM_01121143(Tv11)/NM_0011008697(Tv2)，在多细胞动物中高度保守的核磷酸化蛋白，与剪接体相关。STIP最初定位于小鼠牙齿成釉细胞（amleoblasts）的顶尖分泌池，在HEK293细胞中发现其定位于靠近SC35核斑点的亚核结构。STIP为线虫的胚胎发育所必需分子。

STIP在恶性血液肿瘤中的作用国内外尚未见报道。我们首次研究发现，STIP的mRNA和蛋白质水平在淋巴细胞白血病细胞株和患者中高表达。在B淋巴细胞白血病ARH-77中STIP主要定位在细胞核中。在B淋巴细胞白血病ARH-77细胞中采用siRNA下调STIP基因表达后可抑制ARH-77细胞增殖，增加ARH-77细胞的死亡率，减少ARH-77细胞的恶性增殖潜能，阻滞细胞周期在S期。Western blot检测发现下调STIP的表达后，pERK1/2活性显著降低，p21的表达下调。基于以上研究成果，表明STIP与淋巴细胞白血病的发生和恶性增殖密切相关，STIP是一个可用于淋巴细胞白血病诊断和治疗的新分子。

发明内容

本发明的目的是针对淋巴细胞白血病的发生机制非常复杂，涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活；且目前，已发现的与这些疾病发病相关的分子较少的现状，提供一种作为淋巴细胞白血病诊断的分子标志物STIP的应用方法，该分子的发现将进一步推动恶性血液肿瘤的诊断和治疗。

一种淋巴细胞白血病分子标志物应用于制备治疗制剂的方法，该分子标志物用于制备治疗淋巴细胞白血病的制剂，所述的分子标志物为STIP，氨基酸序列为SEQ ID NO.1；基因转录本序列为SEQ ID NO.2或3。

所述的治疗淋巴细胞白血病的制剂包括RNA干扰制剂。

所述的RNA干扰制剂包括：

正义链CCUGUUAAGCAGGACGACUTT，

反义链AGUCGUCCUGCUUAACAGGTT。

本发明的主要优点和有益效果：

STIP的表达在淋巴细胞白血病中明显增高，表明STIP与淋巴细胞白血病发生密切相关，有望成为新的淋巴细胞白血病诊断分子标志物，在淋巴细胞白血病ARH-77细胞中，干扰STIP表达可抑制肿瘤增殖，增加细胞死亡率，显著降低肿瘤细胞的恶性增殖潜能，阻滞细胞周期于S期，表明STIP是一个淋巴细胞白血病治疗的潜在新靶标。该发明对研究白血病的发生、诊断和治疗具有重大意义。

附图说明

图1为采用Real time RT-PCR方法检测淋巴细胞白血病患者和单纯性贫血患者骨髓单个核细胞中STIP的表达情况；

图2为采用Western blot方法检测不同白血病细胞株及其正常人永生化的B淋巴细胞中STIP蛋白的表达情况；

图3为采用Western blot检测淋巴细胞白血病患者和单纯性贫血患者骨髓单个核细胞中STIP蛋白的表达情况；

图4为采用细胞免疫荧光染色（红色为STIP，蓝色显示细胞核）和Western Blot分析STIP在ARH77细胞中的定位和表达；

图5为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP蛋白的表达；

图6为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP表达后细胞死亡率（FL2-M1百分率）明显增加的图片（三次独立实验的代表性结果）；

图7为在ARH-77细胞中采用siRNA干扰STIP的表达后细胞增殖速率明显减慢（a）及细胞恶性增殖能力明显减弱的图片（b）；