[发明专利]单体衣康酸的一种制备方法

权利要求书

1.一种以土曲霉(Aspergillus terreus)ZS01为出发菌株，发酵制备单体衣康酸的方法，其特征在于： 

1)微波诱变：土曲霉ZS01为出发菌株，斜面活化，将孢子用无菌生理盐水洗下，倒入装有玻璃珠的灭菌三角瓶中，35℃，摇床振荡活化，制备单孢子悬液。微波照射，将处理过的孢子悬液进行梯度稀释，涂布于平板。挑平板上透明圈大的单圈落，上摇瓶发酵，获得衣康酸高产菌株； 

2)种子培养：取一环经活化的高产菌种，接种于500ml三角瓶中，于摇床上培养2天； 

3)气升式发酵罐发酵：接种至装有发酵培养基的气升式发酵罐中发酵培养； 

4)纱布过滤：用洁净纱布过滤除去衣康酸发酵液中的菌丝体； 

5)活性炭脱色：添加1～2％的活性炭，吸附脱色1h； 

6)过滤：将经脱色处理的发酵液泵入过滤器中，去除活性炭及其它不溶物； 

7)离子交换树脂：用湿法将处理好的阴离子交换树脂装入玻璃交换柱，通入1.5mol/LNaOH溶液，流速为2Bv/h(Bv表示树脂床体积)，时间为1～2h，再用去离子水洗至pH8～9，通入衣康酸发酵液，NaOH溶液洗脱； 

8)浓缩：洗脱液于真空度为0.05Mpa的浓缩罐中浓缩； 

9)真空干燥：真空度低至0.08Mpa，升温干燥，得到单体衣康酸，含量＝99.60％。 

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的斜面培养基(g/L)：玉米淀粉7～10、(NH₄)₂SO₄3～6、MgSO₄·7H₂O0.4、FeSO₄·7H₂O0.4、pH4.0～4.5、琼脂10～16；平板培养基(g/L)：玉米淀粉7～10、(NH₄)₂SO₄4～8、MgSO₄·7H₂O0.4、LiCl0.05～0.2、溴甲酚绿0.2、pH4.0～4.5、琼脂10～16； 发酵培养基(g/L)：玉米淀粉8～15、NH₄NO₃4～8、MgSO₄·7H₂O0.4、FeSO₄·7H₂O0.4、pH4.0～4.5。 

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的无菌生理盐水为0.85％氯化钠；摇床振荡活化温度为30～40℃，时间为0.5～1.5h；微波照射处理时间为10～25s；经筛选菌落摇瓶发酵的温度为30～40℃，时间为48～72h。 

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述的种子培养基(g/L)：玉米淀粉50～60、NH₄NO₃5～8、MgSO₄·7H₂O2、FeSO₄·7H₂O0.4、pH4.0～4.5；种子培养温度为30～40℃，摇床转速为150～250r/min。 

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的发酵培养基(g/L)：玉米淀粉120～150、NH₄NO₃6～10、MgSO₄·7H₂O2、FeSO₄·7H₂O0.4、pH4.0～4.5。 

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述的接种量为8％～10％，通风量1～1.5vvm，发酵温度30～40℃。 

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7)所述的阴离子交换树脂为D311。 

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7)所述的发酵液上柱流速为3～6mL/min，以1～2mol/L的NaOH溶液为洗脱剂，洗脱流速为5～8mL/min。 

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤9)所述的真空干燥温度为50℃以上，干燥时间1～2h。