[发明专利]一种浓缩己酸菌液的制备方法

权利要求书

1.一种浓缩己酸菌液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将己酸菌（Clostridium kluyveri）接种于己酸菌菌种培养基中，在33～35℃活化培养5～7天，制得种子液；

（2）按体积百分比5%～10%的比例将步骤（1）制得的种子液接种于通入CO₂的发酵培养基中，在33～35℃的条件下发酵培养6～8天，制得细胞浓度为1.0～1.5×10⁸CFU/mL、己酸浓度为5.5～9.4g/L的发酵液；

（3）将步骤（2）制得的发酵液经0.1μm微孔膜过滤浓缩，除滤液，制得浓缩己酸菌液；

所述步骤（2）中的发酵培养基组分如下：

乙酸钠5～8g/L，氯化锌0.01～0.02g/L，磷酸二氢钾0.2～0.4g/L，麸皮乙醇发酵原液200～280mL/L，玉米蛋白粉水解液20～60mL/L，水定容至1L，pH6.5～7.0；

上述麸皮乙醇发酵原液按如下步骤制备：

向小麦麸皮中加入3.5～4倍85～90℃的水，小麦麸皮以干重计，加入α-淀粉酶，一次保温酶解后，降温至62～63℃，加入糖化酶和普鲁兰酶，二次保温酶解后，制得酶解液，向酶解液中加入酸性蛋白酶，降温至28～30℃，加入耐高温活性干酵母，保温发酵，再加入总重量16～18%的废糖蜜，继续保温发酵，经固液分离除渣，高温灭菌后，制得麸皮乙醇发酵原液；

上述玉米蛋白粉水解液按如下步骤制备：

向玉米蛋白粉中加入6～7倍45～55℃的水，玉米蛋白粉以干重计，搅拌加入硫酸，使硫酸的质量浓度达到0.15～0.20%，升温至105～110℃，保温水解3～4小时，降温至45～55℃，调pH6.0～6.5，经固液分离除渣，高温灭菌后，制得玉米蛋白粉水解液。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述麸皮乙醇发酵原液制备步骤中，α-淀粉酶的添加量为每克小麦麸皮加入8～12Uα-淀粉酶，一次保温酶解时间为35～45min；

所述糖化酶的添加量为每克小麦麸皮加入115～125U糖化酶，普鲁兰酶的添加量为每克小麦麸皮加入4～6U普鲁兰酶，二次保温酶解时间为85～95min；

所述酸性蛋白酶的添加量为每克小麦麸皮加入8～12U酸性蛋白酶；

所述的耐高温活性干酵母的添加量为每升酶解液中加入0.1～0.12g耐高温活性干酵母；保温发酵时间为22～26h，继续保温发酵时间为22～26h。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述固液分离除渣均采用板框过滤进行固液分离除渣。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的高温灭菌均在103～108℃灭菌30min。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述玉米蛋白粉水解液制备步骤中，pH调节剂为氨水。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）己酸菌菌种培养基每升组分如下：

乙醇20mL、乙酸钠6g、硫酸铵400～500mg、酵母浸出粉4～5g，加蒸馏水至1000mL，pH6.5～7.0。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中通入CO₂的发酵培养基是以0.1～0.2vvm的通风量向发酵培养基通气10～15min制得。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中0.1μm微孔膜过滤的进料压力为0.2Mpa。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的己酸菌（Clostridium kluyveri）购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），保藏号为8023。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括将步骤（3）中滤液经蒸馏去除己酸、丁酸后制得的蒸馏后的清液，与麸皮乙醇发酵原液、玉米蛋白粉水解液、磷酸二氢钾及水混合后作为发酵培养基重复利用。

进一步优选的，上述发酵培养基组分如下，均为质量百分比：

蒸馏后的清液50～70%，麸皮乙醇发酵原液18～22%，玉米蛋白粉水解液2～4%，磷酸二氢钾0.01%，剩余部分用水补充。