[发明专利]洋葱腐烂病菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种洋葱腐烂病菌的单克隆抗体及其杂交瘤细胞株。

背景技术

洋葱腐烂病菌(Burkholderia gladioli pv.alliicola)在分类上属于原核生物界（Procaryoces）薄壁菌门（Gracilicutes）肠杆菌科（Enterobacteriaceae）伯克霍尔德菌属（Burkholderia）唐菖蒲伯克霍尔德种（Burkholderia gladioli）洋葱腐烂病致病变种,是我国的检疫性有害生物。该病菌侵染洋葱由叶片侵染至球茎，后期肉质鳞状组织出现水浸状，逐渐腐烂变软，在病害发病后期可看到大量细菌分泌物，并有粘性、腐烂难闻液体流出，直至整个球茎变干、枯萎。洋葱腐烂病菌田间发病率可达到89.1%，传播途径包括带菌种子、鳞球茎、土壤等。目前该菌的检测方法主要包括病原形态及生理生化鉴定方法和分子生物学方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种洋葱腐烂病菌的单克隆抗体及应用。

本发明提供了一种保藏号为CGMCC No.7455的洋葱腐烂病菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株3B2。

本发明还提供了一种洋葱腐烂病菌的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.7455的洋葱腐烂病菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株3B2产生。

上述的单克隆抗体在检测洋葱腐烂病菌中的应用也是本发明保护的范围。

上述的单克隆抗体在制备洋葱腐烂病菌检测试剂盒中的应用；或上述的单克隆抗体在制备检测洋葱腐烂病菌的胶体金快速检测试纸条中的应用，上述应用均是本发明保护的范围。

含有上述的单克隆抗体的检测洋葱腐烂病菌的试剂盒也是本发明保护的范围；或含有上述的单克隆抗体的检测洋葱腐烂病菌的胶体金快速检测试纸条也是本发明保护的范围。

经筛选得到能稳定分泌洋葱腐烂病菌单克隆抗体杂交瘤细胞株3B2，该杂交瘤细胞株3B2的分类命名为分泌洋葱腐烂病菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已于2013年4月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.7455。

本发明的实验证明，本发明研制的单克隆抗体用于检测洋葱腐烂病菌，具有特异性好、效价高，广谱性等优点。本发明提供的洋葱腐烂病菌的单克隆抗体可以应用于洋葱腐烂病菌免疫学诊断试剂，且单克隆抗体由于其是针对单一抗原决定簇产生的，所以具有特异性好的优势，为该病菌免疫学方法的应用奠定了基础。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所用的病菌和试剂如下：

洋葱腐烂病菌(Burkholderia gladioli pv.alliicola)NCPPB947、绿黄假单胞菌（Pseudomonas viridiflava）ATCC13222、桃红欧文氏菌（Erwinia persicinus）NCPPB3375、须芒草伯克霍尔德氏菌(Burkholderia andropogonis)ATCC23060、番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganense subsp.michiganense)ATCC14456、胡萝卜软腐欧文氏菌甜菜亚种(Pectobacterium betavasculorum)NCPPB2793和泛生菌(Pantoea agglomerans)ATCC13329。

碱性磷酸酯酶标记的马抗小鼠酶标抗体购自购自victor，货号:AP-2000。

包被缓冲液、样品抽提缓冲液、酶标抗体稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物溶液配方如下；

每1升包被缓冲液按照如下方法配制：将碳酸钠1.59g，碳酸氢钠2.93g和叠氮化钠0.20g溶于水，用水定容至1L；包被缓冲液的pH值为9.6；

每1升洗涤缓冲液（PBST）按照如下方法配制：将氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠1.15g，氯化钾0.2g，吐温200.5mL，叠氮化钠0.2g溶于水中，用水定容至1L；所述洗涤缓冲液的pH值为7.4；

每1升样品抽提缓冲液按照如下方法配制：将亚硫酸钠1.3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于PBST中，用PBST缓冲液定容至1L；