[发明专利]含有富含亮氨酸重复序列的融合蛋白及其制法和应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白自N端至C端具有式Ia或Ib所述的结构：

A—X—E—Y1—Y2  式Ia；

A—Y2—Y1—E—X  式Ib；

其中，

A为任选的分泌信号肽；

X为Slit2蛋白的富含亮氨酸的重复序列1-2(leucine-rich repeat1-2，LRR1-2)元件；

E为酶切位点；

Y1为第一标签多肽元件；

Y2为第二标签短肽元件，所述第二标签短肽元件为His标签元件；

“—”表示连接上述元件的肽键或肽接头。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1包括SEQ ID NO.:2所示的改良型亲和素标签(Strap II标签)、链亲和素(Strepavidin)标签。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1为Strap II标签，而Y2为8×His标签元件。

4.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Slit2LRR1-2的氨基酸序列如SEQ ID NO.:5所示。

5.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的融合蛋白。

6.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体含有权利要求5所述的多核苷酸。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求6所述的表达载体或转染了权利要求5所述的多核苷酸。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包括哺乳动物细胞；较佳地包括CHO细胞、293细胞。

9.一种制备Slit2LRR1-2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(i)在合适的表达条件下，培养如权利要求8所述的宿主细胞，从而表达权利要求1所述的融合蛋白；

(ii)从培养体系中分离纯化出权利要求1所述的融合蛋白；

(iii)对所述的融合蛋白，用针对元件E的蛋白酶进行酶解，从而制得Slit2LRR1-2。

10.一种制备Slit2LRR1-2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

对权利要求1所述的融合蛋白，用针对元件E的蛋白酶进行酶解，从而制得Slit2LRR1-2。

11.一种纯化的Slit2LRR1-2蛋白，其特征在于，是通过权利要求9或10所述的方法生产制备的。