[发明专利]一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法

权利要求书

1.一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，包括:

（1）对rhG-CSF基因工程菌进行发酵培养，然后将培养菌体混悬于裂解液中，经超声破碎和离心处理，制得包涵体；

（2）将上述包涵体经洗涤和溶解后，进行变性处理，得到变性蛋白溶液；

（3）将所得变性蛋白溶液进行稀释，然后用柱层析进行复性处理，得rhG-CSF复性液；

（4）将复性液进行阳离子层析和凝胶过滤层析，收集得到重组人粒细胞集落刺激因子。

2.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的裂解液为20mMTris-HCl，EDTA1mM，DTT1.5g/L，pH8.0。

3.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中用溶液6M盐酸胍，20mM醋酸-醋酸钠，pH5.4对包涵体进行变性处理。

4.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中用稀释液6M盐酸胍，20mM醋酸-醋酸钠，pH5.4将变性蛋白溶稀释到1～2mg/ml。

5.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的柱层析，所用层析介质为Sephadex G-25coarse、Sephadex G-25media、Sephadex G-25fine或Sephadex superfine。

6.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的柱层析，层析柱直接在5-20cm，柱床高度60-100cm。

7.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的柱层析，层析上样蛋白浓度1.0～2.0mg/ml，上样体积小于柱床体积的20%，上样和洗脱流速为5-10cm/h。

8.根据权利要求1所述的一种重组人粒细胞集落刺激因子的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中的柱层析，所用洗脱液为pH5.4，20mM醋酸-醋酸钠缓冲液。