[发明专利]肺炎支原体基因型快速分型试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域，具体地，涉及用于肺炎支原体基因型分型的质谱模型和基于该质谱模型进行基因型分型的方法以及分型试剂盒。

背景技术

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是引起人类呼吸道感染的重要病原菌，每年约有10%-30%的社区获得性肺炎是由其感染引起的。一般每4-7年发生一次周期性的肺炎支原体大流行，给社会造成了沉重的医疗负担。近年研究发现，肺炎支原体的流行与其基因型别密切相关，因此，肺炎支原体基因分型技术不但是研究其基因差异和抗原变异的重要途径，也是了解其流行暴发的最重要手段。

目前使用的肺炎支原体的基因分型技术主要有p1基因依赖的PCR-RFLP技术（Sasaki,T.,T.Kenri,N.Okazaki,M.Iseki,R.Yamashita,M.Shintani,Y.Sasaki,and M.Yayoshi.1996.Epidemiological study of Mycoplasma pneumoniae infections in japan based on PCR-restriction fragment length polymorphism of the P1cytadhesin gene.J.Clin.Microbiol.34:447-449.）和p1基因依赖的多重PCR技术（Kenri,T.,N.Okazaki,T.Yamazaki,M.Narita,K.Izumikawa,M.Matsuoka,S.Suzuki,A.Horino,and T.Sasaki.2008.Genotyping analysis of Mycoplasma pneumoniae clinical strains in Japan between1995and 2005:type shift phenomenon of M.pneumoniae clinical strains.J.Med.Microbiol.57:469-475.），两种方法均将肺炎支原体分为两个基因型：1型和2型。上述两种肺炎支原体分型方法均为核酸分型技术，首先需要对待分型菌株提取基因组核酸，然后再使用分子生物学技术如：PCR扩增和限制性酶切进行分型。其分型所需试剂成本高，且检测耗时一般超过4个小时，加之操作步骤繁琐，在进行大批量菌株分型时工作量非常大，成为了制约肺炎支原体分型的技术的瓶颈亟待解决。因此研发一种快速、经济且灵敏特异的肺炎支原体分型技术十分必要。随着研究深入，目前两种型别菌株出现了少数p1基因部分核酸序列同源重组的变异型别菌株，但其整体基因水平上仍然属于1型和2型这两大型别范畴。了解当地肺炎支原体型别构成和监测型别转换，是对该地区肺炎支原体大流行监测预警的重要手段，因此，分型技术对与肺炎支原体意义重大。

目前质谱鉴定技术凭借其快速、准确、高通量的特点，在国外已经广泛应用于临床病原菌鉴定。但在国内仅限于实验室使用，且尚无使用质谱技术进行病原分型研究。

发明内容

本发明的目的是提供用于肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）基因分型的试剂盒。

本发明另一目的在于基于质谱技术，提供针对肺炎支原体进行快速分型鉴定的特异性多肽质谱模型。

本发明提供的用于肺炎支原体基因型分型的特征蛋白的质谱模型，含有以下两组肺炎支原体特征蛋白，

1）27个特征蛋白，其分别为:分子量2190.59，2798.57，2970.91，3073.09，3102.52，3166.09，3245.77，3297.86，3335.11，3384.04，4143.83，4323.90，4386.72，4715.60，4797.05，4918.58，4952.92，5392.83，5601.63，5625.51，6149.45，6213.71，6596.82，6773.16，6798.83，9837.83，9901.70；