[发明专利]一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，属于细胞工程育种领域。 

背景技术

对育种家而言，快速纯化育种材料是提高育种效率的主要手段。常规纯化材料的方法是连续自交，往往需要6～8代才能培育出可用作杂交育种的亲本材料，这往往需要6～8年的时间。通过游离小孢子培养只须1～2年就可以得到多种基因型的纯合体，因此，游离小孢子培养是创造稳定变异材料的理想方法，能明显缩短育种进程，提高育种效率。大白菜游离小孢子培养受供体植株基因型的影响非常明显[曹鸣庆,李岩,刘凡.基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响.华北农学报,1993,8(4):1-6；申书兴,梁会芬,张成合等.提高大白菜小孢子胚胎发生及植株获得率的几个因素研究.河北农业大学学报,1999,22(4):65～68]。一般而言，冬性弱的夏材料和秋材料游离小孢子培养容易成功，反之耐抽苔春白菜材料则不易成功。自从1989年Sato[Sato T,Nishio T,Hirai M,Plant regeneration from isolated microspore cultures of Chinese cabbage(Brassica campestris ssp.Pekinensis).Plant Cell Reports,1989,8:486-488]率先对结球大白菜进行游离小孢子培养并获得成功以来，该领域在夏、秋早熟和秋白菜的游离小孢子培养技术方面已日趋成熟[曹鸣庆,李岩,刘凡.基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响.华北农学报,1993,8(4):1-6；栗根义,高睦枪,赵秀山.大白菜游离小孢子培养.园艺学报,1993,20(2):167-170；李岩,刘凡,曹鸣庆.通过游离小孢子培养方法获得小白菜三个变种的胚胎和植株.华北农学报,1993,8(3):92-97；曹鸣庆,李岩,蒋涛,西尾刚.大白菜和小白菜游离小孢子培养试验简报.华北农学报,1992,(02):119-120]，并成功应用于育种实践，先后育成了“豫白菜11号”等早熟白菜品种[栗根义,高睦枪,耿建峰等.春秋适应型大白菜新品种豫白菜11号的选育.河南农业科学,1999,3:24-26；耿建峰,原玉香,张晓伟等.耐热早熟大白菜豫新60及其栽培技术.河南农业科学,2003,5:43]。相比较而言，春白菜的游离小孢子培养一直没有得到技术上的突破。虽然也有少量报到，但进展十分缓慢。如2001年Ajisaka[Ajisaka H,Kuginuki Y,Yui S,Enomoto S&Hirai M.Identification and mapping of a quantitative trait locus controlling extreme late bolting in Chinese cabbage(Brassica rapa L.ssp.Pekinensis syn.campestris L.)using bulked segregant analysis.Euphytica,2001,118:75-81]等对PLNo.2×A9302的F1代进行小孢子培养获得了耐抽苔双单倍体材料DH27，但PLNo.2来源自无球叶的大白菜地方品种“Osaka Shirona Bansei”， 并不是真正的结球春白菜。我国学者近年来也对春白菜小孢子培养进行了不断尝试，主要致力于改进培养基配方并对培养条件进行优化，也取得了一定的进展，但大多只得到胚状体[周英,冯辉,王超楠,刘如娥.大白菜小孢子胚诱导及植株再生.沈阳农业大学学报,2006，37(6)：816-820；潘洪艳,冯辉.2009.春结球黄心大白菜小孢子胚诱导和植株再生.中国蔬菜,8:32-35]。总体而言，目前耐抽苔春白菜游离小孢子培养体系远未建成，其离春白菜育种实践仍有很大差距。因此亟待建立适应性好的春白菜游离小孢子培养技术体系。 

发明内容

针对上述现有技术，针对春白菜游离小孢子培养方面的不足，本发明提供了一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，可以对各种春白菜材料进行培养，大大缩短了春白菜亲本材料的纯化年限，对提高春白菜新品种培育效率意义尤为重大。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，包括以下步骤： 

（1）供体植株基因型改良：取易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料，与待培养小孢子的耐抽苔春白菜材料进行杂交，得杂交种子；