[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域。具体涉及一种用于牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测的阻断ELISA试剂盒，还涉及一种用检测牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒的用途。

背景技术

牛传染性鼻气管炎（Infectious Bovine Rhinotracheitis，IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious Bovine Rhinotracheitis viruse，IBRV）即牛1型疱疹病毒（Bovine herpe svirus-1,BHV-1）引起的一种牛呼吸道接触性传染病，又称“坏死性鼻炎”、“红鼻病”。

牛1型疱疹病毒（BHV-1）是疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的成员，它是一种有囊膜的双股DNA病毒。BHV-1的病毒粒子为圆球型，成熟的粒子直径约有150～220nm，主要包括核心、衣壳被膜和囊膜三部分。其中核心是由病毒的DNA和蛋白质相互缠绕而成，而核衣壳是一个二十面体，它外观呈六角形，空间上立体对称。其外表面有162个壳粒，周围是一圈带有脂质的囊膜。

牛传染性鼻气管炎的临床症状分为呼吸道型、生殖道型、流产型、脑炎型和眼炎型五种。呼吸道型表现为鼻气管炎，为本病最常见的一种类型；生殖道型表现为母畜外阴阴道炎，又称传染性脓疱性外阴阴道炎，公畜龟头包皮炎，因此称传染性脓疱性龟头包皮炎；流产型一般见初胎青年母牛怀孕期的任何阶段，也可发生于经产母牛；脑炎型：易发生于4～6月龄犊牛；眼炎型表现为结膜角膜炎，常与呼吸道型合并发生。IBRV感染后虽然没有显示出很高高的死亡率，但是感染后会造成潜伏感染和终生感染，而且病牛会长期甚至终生都带毒，当机体的抵抗力降低时，则又重新激活，向外排毒，使得该病极难根治。

该病于1955年被首次发现，至今几乎所有的国家均检出IBR抗体。目前仅在澳大利亚、丹麦、芬兰、挪威、瑞典、瑞士根除了该病。我国最早是于20世纪70年代在进口牛群中发现该病。20世纪80年代由周泰冲等在深圳海关从新西兰的进口奶牛中分离出该病病毒，之后在1986年由邓沛霖、1987年由王则兴等又从乳牛、水牛、黄牛中分离到此病毒，证实IBR在我国牛群中确实存在。在本实验室，2012年由范强等利用乳胶凝集抗体检测的方法检测了从我国内蒙古、新疆和江苏三省采集的521份临床样品，阳性率达到34.57%。

病毒中和试验（VN）和酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测抗体的常规方法，欧洲的实验室已经建立一些阻断ELISA方法，主要应用于牛传染性鼻气管炎的流行病学调查中。本发明制备了牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体，用辣根过氧化物酶（HRP）标记该单抗，建立了阻断ELISA抗体检测方法，为牛传染性鼻气管炎提供可靠的数据支持。

目前许多发达国家均在推行牛传染性鼻气管炎的控制和消灭计划，其基本做法法是推广使用基因缺失疫苗和配套的鉴别诊断试剂盒，一方面通过疫苗免疫降低发病率和感染率，另一方面通过鉴别诊断筛选出免疫后的带毒牛，将带毒牛进行隔离饲养或直接淘汰，逐步使牛群得到净化。我国作为养牛大国，牛传染性鼻气管炎的危害十分严重，有条件的牛场应当借鉴发达国家的做法和经验，逐步实施对牛传染性鼻气管炎的控制和净化，提高经济效益。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种用于牛传染性鼻气管炎gB病毒抗体检测阻断ELISA试剂盒，该试剂盒敏感性强，特异性高，使用方便，易于标准化，与美国IDEXX gE阻断试剂盒相比，有很高阳性符合率及阴性符合率，可以作为诊断牛传染性鼻气管炎的标准方法。

本发明的另一个目的是在于提供了一种牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒在检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体中的应用，该应用用于检测牛血清中有无牛传染性鼻气管炎病毒的抗体出现，即检测被检牛是否感染牛传染性鼻气管炎病毒，灵敏性极强，几乎无假阳性及假阴性出现，尤其适用于大规模样品的检测，可以作为调查牛传染性鼻气管炎流行情况的金标准。

为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是：