[发明专利]人体或动物组织的脱水包埋改良方法

说明书

技术领域

本发明是涉及人体或动物组织的脱水包埋改良方法，该方法可广泛应用于医学、生物学等领域的研究。

背景技术

石蜡切片（paraffin section）技术是医学组织学、发育生物学等研究的主要实验方法，同时也是观察人体或动物组织结构变化的重要手段。人体与动、植物标本的形态学观察、免疫组化、原位杂交及原位PCR等检测技术，都离不开标本组织处理和石蜡切片的制作。

制作石蜡切片的最终目的，需将组织通过脱水包埋处理制成石蜡块。常规的石蜡切片技术包括五个基本步骤，即固定、脱水、透明、浸蜡和包埋。其中脱水包埋过程是关系到切片质量与组织后续实验成功与否的重要步骤。组织脱水指通过某种溶剂将组织内的水分逐渐置换出来的过程，因为水与石蜡互不相融，脱水后有利于透明剂和石蜡的渗入。一般医学以及生物学中的脱水过程是利用由低到高浓度梯度的乙醇逐级完成的，由于乙醇与石蜡也不能混合，因此需要经过一种乙醇与石蜡之间的媒浸物，即透明剂，用透明剂取代组织中的乙醇，使液态的石蜡最终取代透明剂以顺利地渗入组织间隙中，最后用石蜡浸渍组织并铸制成坚实的蜡块用于制成石蜡薄片，另外，石蜡对组织具有良好的保护作用，将组织包埋在石蜡中可长期保存备用。

目前，石蜡切片技术中通常用到的透明剂是二甲苯（Xylene，C₆H₄(CH₃)₂），它能溶于醇，也为石蜡的溶剂，但不能与水混合。二甲苯的透明速度快，但它对组织的收缩性很强，组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆变硬，会严重影响切片质量。有些组织如肌肉、肌腱、软骨、骨、皮肤、头发和眼球等，由于组织过硬不宜用二甲苯透明。另外，二甲苯也极易挥发，对人体危害较大。除二甲苯以外，甲苯、苯、香柏油、氯仿等也可作为透明剂。甲苯和苯的性质与二甲苯相似，香柏油对组织收缩性小，但透明速度极慢，3mm以下厚度的组织块需要透明12h以上，5mm厚的组织块需要透明25h～36h，而香柏油不易与石蜡融合，因此经香柏油透明后，须经二甲苯短时间媒浸才能进行石蜡包埋。除此之外上述溶剂也易挥发且气味较重，对人体具有一定程度毒副作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种简单有效、成本低廉、克服了切片时石蜡组织块易碎的缺陷、且不容易破坏人体或动物组织的脱水包埋改良方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为一种人体或动物组织的脱水包埋改良方法，包括固定、脱水、透明、浸蜡和包埋，其具体过程为，首先将固定后的组织通过由低到高浓度的乙醇进行梯度脱水（第一步脱水），然后将梯度脱水后的组织放置于体积比为1∶1~1.5的无水乙醇（通常无水乙醇中乙醇的体积浓度在99.7%以上）与丁醇中进行混合液脱水（第二步脱水），混合液脱水的时间为30min～60min，再将混合液脱水后的组织放入丁醇中于4℃～16℃的温度下进一步脱水（第三步脱水），进一步脱水的时间为8h～20h；脱水完成后，将组织浸渍于丁醇中进行透明；最后将透明后的组织进行浸蜡和包埋。

上述方法中，所述丁醇优选正丁醇或异丁醇。 

上述方法中，优选的，所述混合液脱水与所述进一步脱水过程中使用的丁醇具有相同的分子结构式，更优选同时使用异丁醇；所述脱水过程与透明过程中使用的丁醇具有不同的分子结构式，更优选脱水过程使用异丁醇，透明过程使用正丁醇。

上述方法中，所述梯度脱水的过程为：将所述组织依次通过50%体积浓度的乙醇脱水5min～30min（优选10min～20min）、70%体积浓度的乙醇脱水1h～3h、80%体积浓度的乙醇脱水0.5h～3h、95%体积浓度的乙醇脱水20min～120min（优选60min～120min）和无水乙醇脱水20min～120min（优选60min～120min）；所述梯度脱水的过程优选在4℃～16℃温度下进行。

上述梯度脱水过程中，95%体积浓度的乙醇优选脱水两次，第二次脱水所用乙醇为重新换过的95%体积浓度的乙醇。

上述梯度脱水过程中，无水乙醇优选脱水两次，第二次脱水所用乙醇为重新换过的无水乙醇。

上述方法中，所述透明过程中组织的浸渍时间优选1h～4h。

上述方法中，所述浸蜡过程为：将透明后的组织先浸没于熔点为45℃～56℃的软蜡中0.5h～2h，再浸没于熔点为56℃～60℃的硬蜡中0.5h～2h。

与现有技术相比，本发明的优点在于：