[发明专利]水稻转录因子Os01g18440基因的应用

权利要求书

1.水稻转录因子Os01g18440基因在提高水稻产量及调控水稻高杆性状中的应用，所述水稻转录因子Os01g18440基因的序列为：

i）Seq ID No.1所示的核苷酸序列；

ii）在严格条件下与Seq ID No.1所示序列杂交的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1%SDS的0.1×SSPE或含0.1%SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其是将水稻转录因子Os01g18440基因的CDS序列构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻，筛选并最终获得转基因水稻；

所述VP16来自单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus），4个转录因子激活基序VP16的核苷酸序列如Seq ID No.3所示。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，其是将水稻转录因子Os01g18440基因的CDS序列通过Gateway系统构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻，筛选并最终获得转基因水稻。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）根据水稻转录因子Os01g18440基因序列设计PCR扩增引物对，其为正向引物F：5′-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGCTCGCAAGAAGATCGT-3′和反向引物R：5′-CAAGAAAGCTGGGTCTTACATGGGAGGGAAAGATGG-3′；

2）以野生日本晴水稻cDNA为模板，利用上述引物，通过PCR扩增获得Os01g18440基因全序列；

3）将PCR产物克隆至pDONER克隆载体上，经测序正确；

4）以双元表达载体pCAMBIA1300左右边界包含的序列为骨架序列，通过体外重组，将ubi promoter-VP64-Gateway表达单元、35S promoter-asRED表达单元和35S promoter-bar表达单元与之融合构建，得到载体nVP64-bar-asRED的全序列如Seq ID No.4所示；

5）通过LR反应将目的基因Os01g18440构建到载体nVP64-bar-asRED上，获得植物表达载体ubi：VP64-Os01g18440，其序列如Seq ID NO.5所示；

6）采用农杆菌介导法、直接DNA转化、微注射或电穿孔方法将载体ubi：VP64-Os01g18440导入水稻中，筛选并最终获得转基因水稻。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤6）采用农杆菌介导的方法，利用pCAMBIA1301将载体ubi：VP64-Os01g18440转入水稻愈伤组织中，用含诱导剂和农杆菌的AAM转化液进行转化，转化后的材料经过共培养、脱菌、筛选、分化、生根、炼苗和移栽，用Basta筛选转基因水稻植株。

6.植物表达载体ubi：VP64-Os01g18440，其核苷酸序列如Seq ID NO.5所示。

7.含有权利要求6所述载体的工程菌。

8.权利要求6所述载体在提高水稻产量及调控水稻高杆性状中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，采用农杆菌介导法、直接DNA转化、微注射或电穿孔方法将载体ubi：VP64-Os01g18440导入水稻中，筛选并最终获得转基因水稻。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，采用农杆菌介导的方法，利用pCAMBIA1301将载体ubi：VP64-Os01g18440转入水稻愈伤组织中，用含诱导剂和农杆菌的AAM转化液进行转化，转化后的材料经过共培养、脱菌、筛选、分化、生根、炼苗和移栽，用Basta筛选转基因水稻植株。