[发明专利]一种用于禽肿瘤病检测的PCR复合参照物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种PCR复合参照物，特别是一种用于禽肿瘤病检测的PCR复合参照物及其制备方法，及其用于检测禽肿瘤病的方法和试剂盒。

背景技术

病毒性肿瘤病是家禽最为常见的自发性疾病，可致肿瘤性死亡和生产性能下降，造成重大经济损失。这类疾病包括由反转录病毒引起的禽白血病（AL）、禽网状内皮组织增生症（RE）和由疱疹病毒引起的马立克氏病（MD）。MD、AL、RE均呈世界性分布。MD受害鸡群发病率从30%至50%不等，有的高达60%乃至全群覆灭，虽然应用疫苗后MD得到一定程度的控制，但是发生免疫失败和出现强毒力的致病型毒株的报道不断增多；由白血病引起的成年鸡的淘汰率可达全部成年淘汰鸡的10%；尽管REV很少又发临床疾病，但是由于病毒分布广泛，常引起免疫抑制，其危也害业相当严重。

通过对鸡群进行检测，淘汰带毒的种鸡，不断净化达到纯化种群的目的是防治MD、AL、RE的主要方法之一。国内外已建立了检测MD、AL、RE的方法,主要包括传统的病毒分离与鉴定、血清学检测方法和分子生物学检测方法。由于MD、AL、RE等病毒性肿瘤疾病在临床表现、病理变化上很相似,传统的鉴别诊断方法很难将其准确、快速鉴别开来,给疾病的诊断及防制工作带来困难。与传统的诊断方法相比，PCR技术具有快速、敏感、特异的特点。因此该技术在MD、AL、RE的检测方面也得到广泛的应用。

用PCR检测这三种病原，需要有阳性参照物，传统所用的阳性参照物是用病毒，因为只有病毒才能够提供进行PCR所需的DNA。普通情况下，一些病原培养简单，培养过程中间也不存在病原扩散的危害，可以用全病毒作为PCR的对照样品，但是三种禽肿瘤病病毒MD、AL、RE的培养条件不同于一般病毒的培养，其培养特性较其他病毒的培养困难，表现在病毒经过培养后需要在液氮状态下冻存、病毒对于培养的细胞不敏感、要求高、对于培养的营养条件要求非常苛刻，因此用这三种病毒作为PCR的阳性参照物非常困难，尽管PCR技术本身检测这三种病原的条件和技术已经非常成熟，但由于获得参照物比较困难，也增加了这三种疾病的PCR检测技术的难度。

发明内容

一方面，本发明提供一种用于禽肿瘤病检测的PCR复合参照物，该PCR复合参照物具有SEQ ID NO:1所示序列。

SEQ ID NO:1：