[发明专利]一种用于锁阳种子生活力测定的离体胚培养方法

说明书

技术领域

本发明属于荒漠区名贵中药材种子质量鉴定及栽培领域，特别涉及一种用于锁阳种子生活力测定的离体胚培养方法。

技术背景

锁阳(Cynomoriumsongaricum)为锁阳科(Cyno-moriaceae)锁阳属(Cynomorium)多年生肉质寄生草本种子植物，多寄生于蒺藜科(Zygophyllaceae)白刺属（Nitraria)植物的根部。与白刺的分布系统相似，锁阳多生于干旱沙漠地带及荒漠区的湖盆边缘和洪积、冲积扇缘地带的盐渍化沙地，被列为名贵中药材的上品，素有“沙漠人参”之称。现代研究表明，锁阳在抗肿瘤、调节人体免疫、延缓衰老和防治心血管疾病等方面也具有重要作用。除药用价值外，锁阳还可提炼拷胶，用于酿酒和饲料等，因此它具有重要的经济和药用价值。近年来由于掠夺式采挖，使药源不断减少，锁阳野生资源已处于濒临枯竭状态。为拯救和保护锁阳资源，结合生态恢复和盐碱地改造，在西北干旱地区进行锁阳人工种植刻不容缓。由于锁阳种子存在种皮致密坚硬、种子表面附属物影响、胚后熟、种皮内存在发芽抑制物质等复杂的休眠特性，导致自然萌发十分困难，严重地阻碍了锁阳的自然和人工繁殖。近年来，内蒙、甘肃、宁夏等地结合生态建设展开了锁阳的人工接种和栽培，但种子资源紧缺、质量不稳定等因素严重制约了该产业的发展。针对这种现状，许多学者对如何破除锁阳种子的休眠做了大量研究，期望通过破除其休眠而降低人工繁殖的难度。中国专利CN102742397A公开了一种利用氯化钠和赤霉素3促进锁阳种子萌发的方法，此法可破除锁阳种子的休眠并使其在40天内有10-37%的种子发芽，该方法在一定程度上能够破除种子的休眠，并有效激发种子发芽的潜在能力。

种子发芽的潜在能力是种子生活力的表现形式，种子生活力对预测休眠种子的发芽力和快速预测种子发芽率具有重要意义。由于锁阳种子价格昂贵，籽粒较小，且具有特殊的休眠特性，种子表面有附属物且硬实率高，种胚包埋在致密坚硬的胚乳中，现有技术中用一般的生化方法对锁阳种子进行处理、促使其发芽、测定其生活力的过程中，并不能完全破除种子的休眠，而出现种子的发芽率低、种子生活力下降及可重复性差等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种相较其他方法、简便易行、原理可靠、可重复性好的用于锁阳种子生活力测定的离体胚培养方法，这种离体胚培养方法可快速测定种子的生活力。

本发明的另一个目的是提供一种快速安全地剔除种子表皮附属物、快速破除锁阳种子硬实的方法，该方法能减少操作过程中人工作业和作业危险，工作效率高，重复性好。

下面对本发明的内容及步骤做具体的说明:

本发明用于锁阳种子生活力测定的离体胚培养方法，首先扦取锁阳种子，然后对所述锁阳种子进行如下后续处理步骤：

a)净度处理步骤，是将所述锁阳种子清选并过筛，得到净种子；

b)附属物剔除步骤，是将所述净种子通过水或碱浸泡并搅拌，得到无附属物种子；

c)硬实破除步骤，随机抽取步骤b）获得的若干无附属物种子，进行若干次重复实验，采用1-2mol/L的碱溶液对所述无附属物种子处理3-5h；

d)去皮取种仁步骤，是采用挤压法去除种皮，取出种仁，得去皮后种仁；

e)离体胚培养步骤，是将所述种仁置于经蒸馏水润湿的纸床上，于15-25℃光照条件下在气候箱内培养10-20天，得培养后种仁；

f)生活力测定步骤，是从培养后种仁中挑选出坚硬、呈现乳白色或略带灰褐色、体积稍有增大或有吸盘长出的种仁，作为有生活力的种子，并计算有生活力种子的百分率。

本发明所用的“纸床”指种子专用发芽纸，具有很好的吸水性、保水性、无毒害和较高的强度，是供种子萌发和幼苗生长的载体，优选的是北京恒奥德科技有限公司提供，型号：HL3-600，规格：600×600mm。种子发芽纸润湿后，就相当于种子生长的土壤，把一定数量的种子撒在种子发芽纸上面，种子就可以吸收储存在发芽纸中的水分，顺利的发芽。在测定种子发芽率时，使用种子发芽纸可以使种子处于一个标准的润湿状态，而对营养液的吸收均匀，从而提高了种子发芽率测定的准确性。

本发明的“碱溶液”包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾等碱性物质溶液。

本发明的“生活力”是用“有生活力种子的百分率”来表示的，即有生活力种子占供检种子的百分率。