[发明专利]一种含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒及其提取方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物学与分子生物学技术领域，具体涉及一种含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒及其提取方法。 

背景技术

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是一类含有两个或两个以上苯环的有毒有机污染物，具有强烈的致癌作用、致畸作用和致突变作用。PAHs能通过生物累积及食物链的传递作用对生态环境和人体健康造成极大危害，已引起各国环境科学家的高度重视。对环境中多环芳烃的治理技术主要有物理法、化学法和生物法，其中生物法具有操作简单、运行费用低、无二次污染等优点。一般来说，随着多环芳烃苯环数量的增加，其降解速率降低。低分子量的多环芳烃在环境中能较快被降解，在环境中存在的时间较短，而高分子量的多环芳烃，例如芘、荧蒽、苯并[a]芘、苯并[a]蒽、茚并[1，2，3-cd]芘、苯并[b]荧蒽及苯并[k]荧蒽等则难于降解，较长期存在于环境中。因此，构建多环芳烃高效降解菌来强化降解已成为去除多环芳烃污染的一种重要方法。 

多环芳烃降解质粒是细胞内能够自我复制的双链环状的小分子DNA，能降解芳香族化合物的代谢酶通常是由降解质粒基因编码的。因此，多环芳烃降解质粒上携带了部分的降解基因信息，可通过转化作用连接到宿主细菌中构成重组菌，从而使重组菌表现相应的降解多环芳烃的性能。从多环芳烃降解菌株中提取与纯化得到多环芳烃降解质粒对于构建新的多环芳烃高效降解菌以及提高多环芳烃的降解性能都具有重要的意义。但是，国内外缺少关于多环芳烃降解质粒方面的研究报道。 

发明内容

本发明提供一种含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒及其提取方法。所述含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒由无色杆菌Achromobacter sp.的菌液经过提取与纯化得到的。提取与纯化含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒所用的无色杆菌Achromobacter sp.在2010年3月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，该中心位于北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC No.3637。从无色杆菌Achromobacter sp.中提取与纯化含有能够降解荧蒽功能基因的降解质粒的具体方案为： 

(1)向体积为500mL的锥形瓶内加入400mL基础培养基、1.0mL微量金属液、0.1mL维生素c溶液，摇匀后作为液体培养基备用；其中基础培养基的组成为：NH₄NO₃：1.7g·L^-1，KH₂PO₄：1.0g·L^-1，K.₂HPO₄：1.0g·L^-1，MgCl₂：0.30g·L^-1，CaCl₂·2H₂O：0.15g·L^-1；微量金属 液的组成为：CoCl₂·6H₂O：55mg·L^-1，CuCl₂：0.35mg·L^-1，H₃BO₃：11.0mg·L^-1，MnCl₂·4H₂O：45mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O：5.5mg·L^-1，NiCl₂·2H₂O：4.5mg·L^-1，ZnCl₂：4.5mg·L^-1； 

(2)在超净工作台中向体积为100mL的锥形瓶中加入6.0mL浓度为1g/L的荧蒽丙酮溶液，为除去丙酮将锥形瓶开口放置2天； 

(3)向步骤(2)中的锥形瓶内加入60mL按步骤(1)配制的液体培养基； 

(4)在超净工作台中挑取无色杆菌Achromobacter sp.，将其接种至步骤(3)中的锥形瓶中，在温度为25～30℃、转速为100r/min的振荡器中培养20～22天； 

(5)将步骤(4)中的菌液转移到容积为15mL的离心管中，在10000r/min条件下离心10min，弃去上清液；