[发明专利]一种用于血液净化法去除内毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料

说明书

技术领域

本发明属于生物医学工程领域，特别是涉及一种用于血液净化法去除内毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料。 

背景技术

内毒素，即脂多糖，作为革兰氏阴性菌细胞壁的一种成分，在人体内广泛存在。人体在严重创伤、感染等应激状态时，菌体的死亡会释放出大量内毒素，从而导致内毒素血症（Endotoxemia，ETM），进而引起全身炎症反应综合征、脓毒症、多器官功能障碍综合征等。ETM具有高发病率、高死亡率以及高治疗费用等特点[1]。 

内毒素耐热且稳定，尚未找到安全有效的特异性药物，而使用抗生素治疗会导致大量革兰氏阴性菌的死亡进而释放出更多的内毒素。因而现在的临床研究重点越来越多地放在了采用血液净化方法去除体内内毒素上，而血液净化法的根本则是寻找一种高效、安全的净化吸附材料。 

血液净化吸附内毒素材料通常都是通过大分子树脂等直接连接配基或者引入间隔臂连接配基。配基材料的选用是决定吸附材料性质最关键的因素。S.Mitzner等人[2]将聚乙烯酰胺(PEI)固定于纤维素球载体上，吸附内毒素效果明显。将纯化的血清白蛋白共价交联在聚甲基丙烯酸酯上，实验发现可通过静电作用吸附内毒素、TNF、IL-6等[3]。多粘菌素B是唯一有抗内毒素作用的抗生素，特异性强、吸附效率高，日本的研究人员将多粘菌素B固定在中空纤维膜内壁上去除血浆中内毒素[4]。 

应用氨基酸作为内毒素吸附材料的研究，方晖等人[5]曾采用球形纤维素连接多种氨基酸，从而研究了其不同的吸附效率；徐堃等人[6]则研究了以PVDF基膜连接不同氨基酸的内毒素吸附材料。 

本发明选择了氯甲基化聚苯乙烯-二乙苯烯树脂为基底材料，以对人体安全无害的肝素连接苯丙氨酸制成吸附材料。该材料兼具了安全无毒性和良好的血液相容性，同时保持了较高的血浆中的内毒素吸附率。 

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于血液净化法去除内毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料。本发明所述肝素-苯丙氨酸吸附材料对血浆中内毒素的去除率高，且血液相容性好，对人体安全无毒。 

为实现上述目的，本发明采取如下措施： 

本发明所述用于血液净化法去除内毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料，经如下方法制备而成：以氯甲基化聚苯乙烯-二乙苯烯树脂（以下简称氯甲基树脂）为基底材料，经乙二胺氨基化后，制成氨基化氯甲基树脂；之后使用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺，即EDC/NHS作为催化剂连接间隔臂肝素，制成肝素化氯甲基树脂；最后仍以EDC/NHS为催化剂在肝素上连接苯丙氨酸，制成肝素-苯丙氨酸吸附材料。 

具体地，本发明所述用于血液净化法去除内毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料，经如下方法制备而成： 

（1）氯甲基树脂的氨基化 

取氯甲基树脂采用无水乙醇和蒸馏水交替洗涤各三次，抽滤泵抽干备用；将所得氯甲基树脂5～10g置于20～60ml1,4-二氧六环中溶胀2～6h，转移至三颈烧瓶中；取0.1～1g四丁基溴化铵和1～10g NaOH溶于40ml蒸馏水后加入至三颈烧瓶中；再向三颈烧瓶中加入10～50ml乙二胺；控制反应温度为40～100℃，搅拌反应1～9小时；将反应所得产物过滤，取滤渣用无水乙醇和蒸馏水交替洗涤至中性，最后经真空干燥，得氨基化氯甲基树脂； 

（2）间隔臂肝素的连接 

取柠檬酸缓冲液100ml，采用0.1～1.0mol/L的NaOH溶液调节柠檬酸缓冲液的pH至3～7，采用蒸馏水定容至200ml，再加入0.5～1g步骤（1）所得的氨基化氯甲基树脂、1～10g肝素和1～10g催化剂EDC/NHS，其中催化剂EDC/NHS中EDC和NHS的摩尔比为1︰1；于20～50℃下震荡反应20～40小时；将所得产物进行抽滤，取滤渣用PBS洗液洗涤三次，真空干燥备用，得肝素化氯甲基树脂； 

（3）配基苯丙氨酸的连接 

取柠檬酸缓冲液100ml，采用0.1～1.0mol/L的NaOH溶液调节柠檬酸缓冲液的pH至3～7，采用蒸馏水定容至200ml，加入1～10g苯丙氨酸和1～5g催化剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，即催化剂EDC，活化0.5～1h；再加入0.5～10g步骤（2）所得的肝素化氯甲基树脂和1～10g催化剂EDC/NHS，其中催化剂EDC/NHS中EDC和NHS的摩尔比为1︰1；于10～40℃下振荡反应10～50h；将所得产物进行抽滤，取滤渣用PBS洗液洗涤三次，真空干燥备用，即得肝素-苯丙氨酸吸附材料。