[发明专利]一种大环内酯类化合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种大环内酯类化合物及其制备方法和应用，属于生物农药技术领域。 

背景技术

米尔贝霉素是微生物天然产物农药，已有数据表明米尔贝霉素是当今世界上最优良的杀螨剂，美国环保署认定其为低危险性杀虫剂，在荷兰被批准为“GNO”（作物生产中的天然产物），属生态友好型农药，适用于有机农业病虫害的综合防治，在发达国家已成为一种受欢迎的杀虫杀螨剂。尼莫克汀（Nemadectin）属于米尔贝霉素族抗生素。以尼莫克汀为基础半化学合成的莫西克汀（Moxidectin）同伊维菌素（Ivermectin）的作用机制基本相似，但比伊维菌素具有更高的活性，可用于抗多种体内外寄生虫，其中内寄生虫主要是线虫，外寄生虫有螨、蜱和蚤类。莫西克汀抗寄生虫特点是：作用强烈，用药量少，并且对人安全、无毒害、不污染环境，只杀害虫，不杀害虫天敌，也不易产生抗药性，可以作为该类药物产生抗性的复配及轮换用药。该抗生素是目前最有前途的广谱、高效、无交叉感染的生物杀虫剂，被誉为当今活性最高的杀虫剂之一。 

发明内容

本发明提供一种大环内酯类化合物，其分子结构如下： 

本发明还提供一种大环内酯类化合物，其分子结构如下： 

本发明还提供了一种上述大环内酯类化合物的制备方法，是以尼莫克汀产生菌（Streptomyces microflavus neau3）为出发菌株，发酵生产上述大环内酯类化合物。 

所述制备方法，步骤如下： 

1）发酵培养尼莫克汀产生菌，收集发酵液； 

2）发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用甲醇提取； 

3）将得到的浸提液浓缩至一定体积后用乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩后依次进行硅胶柱层析，RP-18柱层析，层析得到两种化合物。 

本发明的化合物是采用如下具体方法来制备的： 

1、发酵 

（1）发酵菌种：发酵菌种是尼莫克汀产生菌（Streptomyces microflavus neau3），由东北农业大学生物化工实验室提供，保藏于“中国普通微生物菌种保藏管理中心”，保藏号为：CGMCC No.3316，该菌株已在专利“一种抗寄生虫的化合物及其制备方法（CN101875679A）”中公开。该菌株的16S rRNA的Genbank登录号为：DQ924968。 

（2）斜面培养：培养基组成（g/L）：葡萄糖10，麦芽糖3，酵母抽提粉3，K₂HPO₄·3H₂O0.5，MgSO₄·7H₂O0.5，NaCl0.5，KNO₃1，琼脂粉20，pH7.0-7.2，用去离子水配制，于121℃下灭菌20min。接菌后置于28℃培养箱中，培养8-9d。 

（3）种子培养：种子培养基组成（g/L）：葡萄糖5，麦芽糊精5，可溶性淀粉1，酵母粉5，牛肉膏1，酪蛋白胨1，pH7.0-7.2，用蒸馏水配制，于121℃下灭菌20min。向菌种斜面上加入10ml无菌水，用已灭菌的接种环刮下孢子制成孢子悬液，使其浓度为10⁷-10⁸c.f.u.ml^-1 。然后取2ml孢子悬液接种于种子培养摇瓶中，种子摇瓶装液量为25ml/250ml，置于250rpm旋转式摇床，28℃培养46h。 

（4）发酵：发酵培养基组成（g/L）：葡萄糖10，乳糖25，棉籽饼粉25，CaCO₃0.3，pH7.0-7.2，用蒸馏水配制，于121℃下灭菌20min。按8%（V/V）接种量，将种子液接入到1L发酵摇瓶中，发酵摇瓶的装液量为100ml/1L。置于250rpm旋转式摇床，28℃发酵培养7-8d。 

2、发酵液处理 

（1）发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用甲醇提取。 

（2）将得到的浸提液浓缩至一定体积后用乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩后依次进行硅胶柱层析，RP-18柱层析，层析后得到两种状化合物。 

本发明还提供了上述两种化合物用于杀螨虫和线虫。 

有益效果：采用本发明的方法得到的化合物具有很强的杀成螨、螨卵及秀丽隐杆线虫活性，具有广泛的应用价值，对我国农用抗生素的开发研究具有重要意义。 

具体实施方式

1、化合物制备：发酵