[发明专利]毒害艾美耳球虫的配子体抗原gam22基因及其应用

权利要求书

1.一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原基因Engam22，其基因全长为713bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.重组鸡毒害艾美耳球虫配子体抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）从毒害艾美耳球虫配子体基因中分离gam22基因：

引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，以配子体总RNA反转录得到的cDNA为模板，扩增713bp的特异性片段，命名为Engam22，将含有目的片段PCR产物经试剂盒纯化回收后，克隆到pGEM-T-easy载体中，得到pGEM-T-easy-Engam22；

2）原核表达载体的构建

特异性引物序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，以构建的pGEM-T-easy-Engam22载体为模板，扩增522bp的特异性片段，并将此片段连接到原核表达载体pET28a中，得到pET28a-Engam22；

3）毒害艾美耳球虫gam22基因的高效表达，纯化，复性

将构建好的原核表达载体pET28a-Engam22转化BL21宿主菌，IPTG诱导表达后，超声裂解释放包涵体后，尿素变性；变性蛋白通过含有HIS标签的Ni-NTA亲和层析纯化后，分别在含有6M、4M、2M、1M尿素的透析液和0M尿素的PBS中各复性8h，最终通过PEG8000浓缩，收集蛋白，12%SDS-PAGE分析，4℃保存。

4.权利要求1所述的Engam22基因在构建核酸疫苗中的应用。