[发明专利]一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法

说明书

所属技术领域 

本发明涉及农用饲料领域，具体的说涉及一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法。 

背景技术

β-葡聚糖作为植物细胞壁的结构性非淀粉多糖，广泛存在于燕麦、大麦、黑麦、小麦等麦类作物中。常见麦类作物中，燕麦和大麦β-葡聚糖含量较高。由于β-葡聚糖是限制麦类作物有效利用的主要因素，常使用β-葡聚糖酶来有效分解麦类植物胚乳细胞壁中β-葡聚糖，以降低饲料中非淀粉多糖（Non-Starch Polysaccharide,NSP）及其抗营养因子的含量。随着微生物发酵技术（包括菌种选育和发酵设备）的快速发展，饲用β-葡聚糖酶制剂得到了广泛应用。国内外大量研究报道了它们在充分利用饲料营养价值、减少水状粘液粪便排放、改善畜禽生产性能和缓解仔猪断奶应激方面均发挥了积极作用。因此饲料中β-葡聚糖酶酶活活性的检测问题引起了饲料界的广泛关注。 

β-葡聚糖酶是降解葡聚糖为葡萄糖的一类酶总称，其测定方法主要有还原糖测定法、粘度法和底物染色法等。还原糖测定法简便准确，且结果重复性好，是广泛使用的一种β-葡聚糖酶酶活测定方法。农业部在2004年颁布了饲料添加剂β-葡聚糖酶酶活测定方法《饲料添加剂β-葡聚糖酶活力的测定》（NY/T911-2004）。此标准适用于饲料添加剂用的饲料酶制剂产品，也适用于添加有β-葡聚糖酶的浓缩饲料和添加剂预混合饲料。 

但该方法测定配合饲料中β-葡聚糖酶活力时存在着一些问题。首先配合饲料(如鸡料、鸭料和浓缩料)中的β-葡聚糖酶活力远低于饲料添加剂中的酶活 力，因此需加大称样量增加酶液中的酶活力。同时配合饲料中含有多种碳水化合物，如葡萄糖、淀粉、木聚糖、纤维素等。这些碳水化合物含有大量的还原性醛基，在煮沸条件下均可与DNS显色剂发生显色反应，导致测定过程中背景值过高（呈咖啡色），检测误差较大。此外制粒、膨化等加工过程中，原料中的一些不可溶或溶解性较差的多糖也可能在高温高压的作用下裂解，增加酶液中碳水化合物的变异度，从而增加了检测的误差。 

发明内容

本发明提供了一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法，该方法为： 

将待检饲料溶解，用透析袋透析，然后用还原糖测定法测定β-葡聚糖酶的酶活。 

其中待检饲料溶解于乙酸-乙酸钠溶液中； 

所用的透析袋截留分子量25000； 

优选的透析袋型号为MD34，USA Spectrumlabs生产； 

通过透析袋，可以将配合饲料中的单糖、寡糖等小分子碳水化合物去掉，避免其对β-葡聚糖酶酶活检测的影响，然后利用分光光度计进行检测。 

具体的说，本发明的一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法，具体方案如下： 

将待检饲料加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液，搅匀，离心，取上清放入透析袋中，然后将透析袋浸入乙酸-乙酸钠缓冲溶液中；4℃条件下避光透析，然后用分光光度计检测酶活。 

在用分光光度计检测时，如果酶活力高于标准曲线范围（0.10mg/mL～0.70mg/mL葡萄糖标准溶液）时可用缓冲液做适当稀释，稀释后的待测酶液中β-葡聚糖酶活力控制在0.02U/mL～0.12U/mL之间。 

本发明的一种检测β-葡聚糖酶酶活的方法解决了配合饲料中β-葡聚糖酶因 为含量低、干扰多以致难以检测的问题，使配合饲料中β-葡聚糖酶的含量得以准确测定。进行加标回收实验，检测的酶活结果与添加量相比回收率均在90%以上。本发明的特别之处在于利用透析袋对样品进行浓缩，此方法国内外文献中未见报道。也适用于一些干扰物质多的饲料或饲料添加剂中β-葡聚糖酶酶活的检测。 

具体实施方式

实施例一 

取3份饲料（来自上海市新农饲料有限公司的“母仔健”浓缩料、上海市红马饲料有限公司的后备蛋鸭饲料和上海超越饲料有限公司的“超越3H-2”黄羽肉鸡中期料），然后分别按下述操作过程进行分析检测。 

分别准确称取10g饲料，加入40mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液（0.1mol/L，pH5.5）。磁力搅拌30min，再用缓冲溶液定容至100mL。3000r/min离心10min，取上清液15mL（若有颗粒悬浮，可先将上清过滤）放入透析袋中（透析袋MD34，USA，截留分子量25000）透析，透析袋浸入乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，缓冲液每隔8h换一次。4℃条件下避光透析24h后，对透析袋中的待测酶液进行检测。