[发明专利]利用分步酶解技术制备鹿血蛋白肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品生物化学领域，具体涉及一种应用两种酶分步酶解制备鹿血蛋白肽的方法。

背景技术

多肽和蛋白质的基本组成单元都是氨基酸，从氨基酸营养的角度来分析，两者没有区别。但是多肽的相对分子质量比蛋白质小很多，并具有一些蛋白质所没有的生理调节功能。由于营养、消化、疾病等原因，或处于一些特殊环境下时，为保持良好状态，提高机体应变能力，就有必要对人体补充外源性的生物活性肽。相对于结构复杂的蛋白质大分子，生物活性肽相对分子质量小，结构简单，能够以完整的形式被机体吸收，在微量或低浓度的情况下即可发挥生物调节作用。因此利用降解技术将蛋白质中的肽释放出来，可提高蛋白利用率，使人体能快速补充营养，补充能量，快速合成人体千万种蛋白质，发挥多种生理活性作用对不同来源的蛋白降解获得。

多年来我国对于鹿血资源的利用仅限于对原血液的利用和加工，其中大部分都是以鹿血酒的形式存在的。因此，我国鹿血开发的产品比较单一，深度开发和利用不足。我国从上世纪七、八十年代开始对畜禽血液的利用进行研究，积累了血液开发的技术和经验。在欧洲、日本等发达国家，猪血的利用率大约在50％左右，他们主要利用酶解和分离技术开发肽类试剂、肽类药物以及功能食品和食品添加剂。因此，利用酶技术和生物技术以及现代分离技术对鹿血蛋白进一步开发和利用，提高产品的附加值，开发具有功能性的活性肽，对促进我国鹿血资源的进一步开发和利用具有重要的理论和实践指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供利用分步酶解技术制备鹿血蛋白肽的方法，利用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鹿血蛋白，既提高抗氧化肽免疫活性，又增强DPPH自由基清除能力。

利用分步酶解技术制备鹿血蛋白肽的方法，其特征在于所述方法步骤如下：

(1)先在称量好的鹿血粉中，按照一定的比例加入蒸馏水，配成底物浓度为4～6％(w/w)的溶液，放100℃的水浴锅中10min，蛋白变性；

(2)然后加入到酶反应器，调整温度为40～60℃，用0.1mol/lNaOH溶液调整pH＝7～8；然后加入中性蛋白酶，酶添加量为(E/S)4～6，反应过程中不断搅拌并用NaOH维持pH恒定，水解2～4h完毕，90℃水浴灭酶10min，迅速冷却；

(3)调整温度为30～50℃，用0.1mol/lHCl溶液调整pH＝5～7，木瓜蛋白酶酶添加量(E/S)6～10％，水解1～2h完毕，反应结束后，灭酶冷却；

(4)水解液3000～5000r/min离心5～15min，收集上清液，喷雾干燥，得到产品。

本发明的对于使用单一一种酶进行酶解所得到的鹿血蛋白肽的相比，所得鹿血蛋白肽抗对·OH的清除能力更强，DPPH自由基清除能力更高。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式按照下述方法制备鹿血蛋白肽

(1)、将鹿血粉与蒸馏水调成一定浓度的溶液。

(2)将步骤(1)鹿血溶液用中性蛋白酶酶解处理，酶灭活；

(3)、将步骤(2)中的鹿血蛋白溶液用木瓜蛋白酶酶解处理，酶灭活；

(4)、将步骤(3)中的鹿血蛋白水解液离心，收集上清液。

在本实施方式中，步骤(1)中所述的鹿血溶液的浓度为4～6％(w/w)，优选为5％(w/w)；步骤(2)中所述的酶处理条件为：pH值7～8，水浴温度40～60℃，加入鹿血溶液6～10％的中性蛋白酶，反应时间2～4h；更优选的，pH值7.5，水浴温度55℃，中性蛋白酶添加量5％，反应时间4h。在本实施方式中，步骤(3)所述的酶处理条件为：pH值5～7，水浴温度30～50℃，加入鹿血溶液6～10％木瓜蛋白酶，反应时间1～2h；更优选的，pH值6.8，水浴温度45℃，木瓜蛋白酶添加量6.5％，反应时间1h。

在本实施方式中，步骤(4)中所述的水解液3000～5000r/min离心5～15min，收集上清液。更优选的，离心速度4000r/min，时间10min。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是，本实施方式按照下述方法制备鹿血蛋白肽：

(1)配制质量浓度5％的鹿血蛋白溶液，调节pH值为7.5，恒温水浴55℃，加入5％的中性蛋白酶，反应3h，90℃水浴使酶灭活，迅速冷却；

(2)、调节步骤(1)中的鹿血蛋白溶pH值为6.8，恒温水浴45℃，加入6.5％的木瓜蛋白酶，反应1h，90℃水浴使酶灭活，迅速冷却。