[发明专利]一种鳗弧菌01血清型灭活疫苗及其制备和使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖动物病害防治技术，具体的说是一种鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型灭活疫苗及其制备和使用方法。 

背景技术

我国水产养殖产量连续十多年居世界首位，成为大农业中发展最快的产业之一。海水养殖产量占水产养殖总量的比例逐年增长，其中海洋鱼类养殖产量近二十多年连续呈现最快的增长，成为最具发展潜力的农业产业之一。由于养殖业多年的集约式快速发展，加上养殖环境不断恶化、养殖品种抗逆性衰退，最终导致海水养殖动物病害频繁发生，造成的直接经济损失每年在130-150亿元，成为限制水产养殖产业持续健康发展的瓶颈。病害的防治手段主要为药物治疗和疫苗免疫。药物治疗涉及抗生素和化学药物的使用，容易造成水产品药物残留和细菌的耐药性，破坏生态环境平衡，对人类健康形成潜在危害，因而在世界范围内受到很大的限制，疫苗免疫在特异性、安全性和保护效果方面优于抗生素等药物治疗，被普遍接受和采用。灭活疫苗安全性好、生产成本低，在挪威、西班牙、北美等鱼类养殖发达国家，多种商业化的灭活疫苗被普遍应用于鲑鱼、鳟鱼、鲇鱼等规模化养殖，极大保障了这些国家和地区的鱼类经济。 

鳗弧菌是引起水产养殖动物败血症的重要病原之一，由其引起的弧菌病是我国水产养殖鱼类的主要疾病，感染的养殖品种涉及大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎、鲈鱼、美国红鱼、鳗鲡、大西洋鲑等重要养殖品种，引起我国养殖鱼类产业的重大经济损失。鳗弧菌有23种血清型，对鱼类致病的有01、02、03血清型。根据流行病学研究资料，感染我国养殖鱼类的鳗弧菌主要为01血清型。为了有效控制疫病的发生，需要根据疾病流行疫区的病原血清型种类，选择免疫原性和保护性高的菌株，研制能够提供有效保护的鳗弧菌疫苗。 

发明内容

本发明目的在于提供一种鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型灭活疫苗及其制备和使用方法。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种鳗弧菌01血清型灭活疫苗，疫苗为鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型，所述鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年12月07日，保藏号为CGMCC No.6942。 

所述疫苗为鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型菌株溶于磷酸缓冲盐溶液中的菌悬液。 

将鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型菌株依次经活化培养、发酵培养和甲醛灭活后，将灭活后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型溶于无菌磷酸缓冲盐溶液中，即为灭活疫苗。 

鳗弧菌疫苗的制备方法，将鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型菌株依次经活化培养、发酵培养和甲醛灭活后，将灭活后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum）01血清型的灭活细胞溶于无菌磷酸缓冲盐溶液中，即为灭活疫苗。 

鳗弧菌疫苗的使用方法，所述灭活疫苗用于制备防治养殖鱼类鳗弧菌病的疫苗；将上述灭活疫苗注射给药量为10⁶～10⁸cells/尾；或浸泡给药浓度为10⁷～10⁹cells/ml，浸泡时间10～30min。 

本发明采用的鳗弧菌菌株01血清型菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2012年12月07日，保藏号分别为CGMCC No.6942，从我国发生鳗弧菌病的养殖牙鲆分离，其生理生化、16SrRNA基因系统发育分析、血清学、PCR鉴定等特征与鳗弧菌的特征符合(参见表1和2；图1A、B；图2)。 

表1弧菌CGMCC No.6942的生理生化特征 

＋：阳性，-：阴性， 

表2鳗弧菌血清型特征 

+，阳性；-，阴性