[发明专利]精品肝素和制备精品肝素的方法

权利要求书

1.一种制备精品肝素的方法，其包括：

向含半乳糖胺杂质的粗品肝素溶液中加入硫酸软骨素酶AC、硫酸软骨素酶B或其混合物处理两次，与半乳糖胺杂质进行酶反应，其中所述半乳糖胺杂质包括硫酸皮肤素、硫酸软骨素和软骨素；

其中所述方法还包括下列的提纯步骤：

除杂质步骤，该除杂质步骤包括乙醇沉淀步骤、氧化步骤；

冷冻干燥；

其中，所述硫酸软骨素酶AC是与MBP融合的硫酸软骨素酶AC；所述硫酸软骨素酶B是与MBP融合的硫酸软骨素酶B。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述与MBP融合的硫酸软骨素酶AC为具有SEQ ID NO:1的MBP-ChonAC；所述与MBP融合的硫酸软骨素酶B为具有SEQ ID NO:2的MBP-ChonB。

3.根据权利要求1所述的方法，其中向肝素溶液中添加胰酶停止酶反应。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述除杂质步骤重复进行两次或三次以上。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，在最后一次乙醇沉淀步骤之前进行氧化并脱色。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，除杂质步骤包括向肝素溶液中添加氯化钙以除去杂质，并进一步添加无水碳酸钠以除去钙离子。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，利用H₂O₂对肝素溶液进行氧化并脱色。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，

所述硫酸软骨素酶AC和粗品肝素的比例为：300IU-30000IU硫酸软骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸软骨素酶B和粗品肝素的比例为500IU-50000IU硫酸软骨素酶B/kg粗品肝素。

9.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，

所述硫酸软骨素酶AC和粗品肝素的比例为：1000IU-15000IU硫酸软骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸软骨素酶B和粗品肝素的比例为1000IU-20000IU硫酸软骨素酶B/kg粗品肝素。

10.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述硫酸软骨素酶AC和粗品肝素的比例为：2000IU-10000IU硫酸软骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸软骨素酶B和粗品肝素的比例为3000IU-12000IU硫酸软骨素酶B/kg粗品肝素。

11.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述硫酸软骨素酶AC和粗品肝素的比例为：3000IU-6000IU硫酸软骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸软骨素酶B和粗品肝素的比例为5000IU-10000IU硫酸软骨素酶B/kg粗品肝素。

12.根据权利要求1所述的方法，其中，获得所述粗品肝素的肝素原料为来自动物组织的含有肝素的原料。

13.根据权利要求1所述的方法，其中，获得所述粗品肝素的肝素原料为来源于猪、牛、羊组织的肝素。

14.根据权利要求1所述的方法，其中，获得所述粗品肝素的肝素原料为来源于猪小肠粘膜的肝素。