[发明专利]L-酪氨酸酶法转化制备方法

权利要求书

1.一种L-酪氨酸酶法转化制备方法，其特征在于：所述方法按以下步骤进行：

（1）将具有丝氨酸脱氨酶活性和酪氨酸酚裂解酶活性的菌株分别在培养基中培养，产生高酶活丝氨酸脱氨酶和酪氨酸酚裂解酶备用；

（2）采用游离细胞法，将丝氨酸脱氨酶细胞和酪氨酸酚裂解酶细胞与含L-丝氨酸的氨基酸料液混合，再加入17-616ml浓度为500g/L的苯酚水溶液，维持溶液中苯酚含量为10g/L，以及浓度为0.2g/L磷酸吡哆醛和浓度为0.01-1.0g/L的表面活性剂，在温度为25～55℃，用体积百分比为25%的氨水调节pH值为 6～11的条件下进行酶促反应，反应时间为6-35小时，反应结束后，转化液中的L-酪氨酸的浓度为16.3-589.6g/L；

（3）将步骤（2）获取的转化液放入离心机，在转速为4000转/分钟离心分离15分钟，收集湿细胞和固体L-酪氨酸混合物，用200-7000ml纯水溶解固体混合物，然后滴加浓度为10mol/L的氢氧化钠调节pH值至12-13，搅拌升温至80℃，将固体混合物完全溶解，加入活性炭脱色除去菌体细胞，将溶液过滤，滤液用浓度为6mol/L的盐酸调节pH值至6，冷却结晶，真空抽滤，用纯水洗涤产品，烘干后获得所需的L-酪氨酸。

2.根据权利要求1所述的L-酪氨酸酶法转化制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的丝氨酸脱氨酶菌株为Escherichia coli K-12，酪氨酸酚裂解酶菌株为Citrobacter freundii ATCC 8090、Citrobacter koseri ATCC BAA-895或Erwinia herbicola ATCC 21434中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的L-酪氨酸酶法转化制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的含L-丝氨酸的氨基酸料液来源于角蛋白水解液或蚕丝水解液，氨基酸料液中总氨基酸含量的重量比W∕W为10%～40%，其中L-丝氨酸在总氨基酸含量中的重量比W/W为10%～90%。

4.根据权利要求1所述的L-酪氨酸酶法转化制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的表面活性剂为吐温80、十六烷基三甲基溴化铵或聚乙二醇辛基苯基醚中的任意一种。