[发明专利]一种鸡传染性法氏囊病活疫苗及其生产方法

权利要求书

1.一种鸡传染性法氏囊病活疫苗，其特征在于该活疫苗含有鸡传染性法氏囊病病毒B87株、CA-C株、CF-C株的三价活疫苗，其中鸡传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus）CA-C株和鸡传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus）CF-C株病毒已于2013年4月1日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号CA-C株为CGMCC No.7405，CF-C株为CGMCC No.7404。

2.权利要求1所述一种鸡传染性法氏囊病活疫苗的制备方法，其特征在于：

（1）鸡胚的接种与收获用灭菌生理盐水/或磷酸盐缓冲肉汤将三株生产用毒种分别稀释至含1000～10000EID₅₀/0.1ml，；将稀释的B87和CA-C株病毒液经尿囊腔、CF-C株经绒毛尿囊膜分别接种10～11日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，置37℃孵育至96小时，弃去48小时前死胚；分别分组收取48～96小时死胚及96小时存活胚胎儿及尿囊膜，装于无菌容器内剪碎，置-20℃以下冻存；冻融2～3次后经离心或过滤去掉沉渣，上清分别为制苗用B87、CA-C和CF-C株半成品，检经无菌检验和病毒含量测定，应无菌检验合格的、用灭菌生理盐水/或磷酸盐缓冲肉汤分别稀释，使病毒含量B87株应≧10^5.0ELD₅₀/0.2ml和CA-C株应≧10^5.0ELD₅₀/0.2ml，CF-C株应≧10^4.5EID₅₀/0.2ml；

（2）配苗及分装取经过检验合格的三种病毒液按体积比1:1:1混合，加入常用冻干保护剂和抗生素经充分混匀，定量分装，分装后迅速进行冷冻真空干燥。

3.如权利要求2所述的一种鸡传染性法氏囊病活疫苗的制备方法，其特征在于IBDV B87株可采用接种CEF细胞生产，方法为：取9～10日龄SPF鸡胚制备成纤维细胞，将B87株生产用毒种用Hank’s液稀释，按10^3.0EID₅₀/ml接种，培养72～96小时，待细胞病变达到70%时，收获细胞培养液，经检验。

4.如权利要求2所述的一种鸡传染性法氏囊病活疫苗的制备方法，其特征在于IBDV CA-C株也可采用接种CEF细胞生产，方法为：取9～10日龄SPF鸡胚制备成纤维细胞，将CA-C株生产用毒种用Hank’s液适当稀释，按10^3.0TCID₅₀/ml病毒液接种，培养72～96小时，待细胞病变达到70%时，收获细胞培养液，经检验。