[发明专利]检测猪萨佩罗病毒的引物、Taqman-MGB探针及试剂盒

说明书

技术领域

    本发明涉及动物病原微生物检测技术领域，具体涉及一种检测猪萨佩罗病毒的引物、Taqman-MGB探针及试剂盒。 

背景技术

猪萨佩罗病毒 (Porcine sapelovirus,PSV)是单股正链RNA病毒，属于小RNA病毒科，肠道病毒属。猪萨佩罗病毒以前被归类为猪肠道病毒A，并曾被命名为PEV-8，但是Krumbholz等2002年在《Journal of Virology》第11期上5813-5821页发表了题为《Sequencing of Porcine Enterovirus Groups II and III Reveals Unique Features of Both Virus Groups》的文章，该文章根据其L和2A基因能将其与其它的猪肠道病毒区分开，因此归类为一个新的属。《病毒分类-国际病毒分类委员会（ICTV）第八次报告》最终将PEV-8称为萨佩罗病毒属，该属包含猪萨佩罗病毒、禽萨佩罗病毒和猿萨佩罗病毒。 

猪萨佩罗病毒粒子为球形，无囊膜，直径25-30nm。首例猪肠病毒感染的报道出现在20世纪30年代，发生在捷克斯洛伐克的捷申病，是一种高死亡率的脑脊髓灰质炎。猪萨佩罗病毒能引起中度或严重的神经系统紊乱、繁殖障碍、肺炎和腹泻。感染猪只康复后依然会继续排毒，成为重要的病毒传播源。 

经对现有的技术文献检索分析发现，Knowles等在《Arch Virol》1979年第62期201-208页发表了题为《Classification of porcine enteroviruses by antigenic analysis and cytopathic effects in tissue culture: div of 3 new serotype》文章，文中介绍了鉴定该类病毒的方法主要依靠抗原分析和猪肾细胞类型方法。Roland Zell等在《Journal of Virological Methods》2000年第88期205–218页发表了题为《Detection of porcine enteroviruses by nRT–PCR: differentiation of CPE groups I–III with specific primer sets》一文，文中介绍了RT-PCR检测方法检测萨佩罗病毒。但这些方法费时费力，操作过程繁琐且不易鉴定。 

目前，鉴定猪萨佩罗病毒的常规方法有病毒分离、病毒中和试验、病变形态观察、抗原分析、RT-PCR等，由于这些技术周期长，操作繁琐或者只能进行定性检测而不能定量分析，并且有时灵敏性不够，尤其是低病毒含量的样品，因此在实际应用中受到限制。目前还没有使用Taqman-MGB实时荧光定量RT-PCR检测该病毒的报道。 

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述不足，提供一种检测猪萨佩罗病毒的引物；另外提供一种检测猪萨佩罗病毒的Taqman-MGB探针；以及提供一种检测猪萨佩罗病毒的试剂盒。 

本发明通过以下技术方案实现上述目的： 

一种检测猪萨佩罗病毒的引物，核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示：

上游引物：5’-GGCAGTAGCGTGGCGAGC-3’（SEQ ID NO:1）；

下游引物：5’-CTACTCTCCTGTAACCAGT-3’（SEQ ID NO:2）。

一种检测猪萨佩罗病毒的Taqman-MGB探针，核苷酸序列为SEQ ID NO:3所示，该序列5’端标记有发光的报告荧光基团，3’端标记有不发光的淬灭基团和二氢环化吲哚卟啉-三肽（dehydrocyclopyrroindole tripetide, DPI3）： 

探针核苷酸序列：5’-CGATAGCCATGTTAGTG-3’（SEQ ID NO:3）。

优选地，上述的检测猪萨佩罗病毒的Taqman-MGB探针，其所述报告荧光基团为FAM（Carboxyfluorescein，羧基荧光素），淬灭基团为NFQ（Non-Fluorescent Quencher, 非荧光淬灭基团）。 

一种检测猪萨佩罗病毒的试剂盒，包括上述SEQ ID NO:1~2的引物，以及SEQ ID NO:3序列结合荧光基团和淬灭基团的Taqman-MGB探针。